[发明专利]一种检测胃癌遗传风险的试剂盒

说明书

技术领域

 本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种胃癌的基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估人群胃癌发生的风险级别，并且指导胃癌高危人群提早预防和治疗。

背景技术

全球每年新发胃癌100余万，中国占42%，死亡约80万，中国占35%，是胃癌发病率和死亡率最高的国家之一，发病率和死亡率均是世界平均水平两倍多。陈万青等2011年在《中国肿瘤登记地区2007年肿瘤发病和死亡分析》中指出： 2007年，在我国前10位癌症中，（1）胃癌发病率为第二位，死亡率为第三位；（2）发病率和死亡率的男女之比均为2比1；（3）农村的发病率是城市的1.6倍、农村的死亡率是城市的1.9倍；（4）死亡/发病比率（相当于患病后的病死风险）为第八位。

目前, 胃癌尚缺乏敏感度高、特异性强的早期诊断指标。随着分子遗传学和分子生物学的不断发展以及基因工程技术的不断进步, 基因的诊断和治疗已逐步成为一种新的肿瘤诊断和治疗手段。近年来, 胃癌的基因诊断和基因治疗在基础研究方面已经取得了较明显的进展。应用基因技术检测肿瘤标志物对胃癌的早期发现、胃癌患者的预后监测、疗效判断等都具有较大的临床使用价值和意义。

谷胱甘肽转移酶基因(GSTM1基因)介导谷胱甘肽的解毒作用。GSTM1整个基因缺失，无法介导谷胱甘肽的解毒作用，致癌物在体内累积，增加胃癌的发病风险。早在2000年，刘屹等的研究结果显示：GSTM1基因缺失多态与胃癌发病相关 ,该基因缺失可作为胃癌的宿主易感性标志之一。 葛艳丽等2008年研究了GSTM1基因缺失多态与胃癌发病的相关性。对48例胃癌组及35例胃炎组患者进行hMSH2的表达及GSTM1基因检测。结果:胃癌组hMSH2蛋白阳性表达率(79.17%)明显高于胃炎组(37.14%)(P<0.05)。胃癌组GSTM1基因缺失率为72.91%,明显高于胃炎组缺失率51.42%(P<0.05)。研究结论:hMSH2蛋白异常表达及GSTM1基因缺失可能参与胃癌的发生机制。

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因是叶酸代谢中的关键基因之一，可将还原型叶酸转变为5-甲基四氢叶酸, 从而削弱5-Fu的抗肿瘤作用。MTHFR 基因多态性与叶酸的浓度及其在细胞内的分布有关, 进而影响肿瘤细胞的生长以及对化疗的敏感性。

目前已发现的MTHFR基因的SNPs位点中,C677T和A1298C是两种最常见与MTHFR活性相关的SNPs。我国学者探讨了MTFHR 基因C677T SNP与中国北方地区人群中食管鳞癌及贲门腺癌危险性的关联,证实MTFHR基因677 T/T 型者更易患贲门腺癌及食管鳞癌。近年来有多篇文献报道MTFHR C677T 多态性与胃癌患者应用氟尿嘧啶类化疗的敏感性及预后相关。

黄朝晖等2008年研究结果表明, MTHFR C677T 基因多态与胃癌患者对5-Fu为基础辅助化疗后的预后有关, 有可能作为5-Fu对胃癌辅助化疗效果的独立预测指标, 用于指导该类药物的个体化使用, 以提高临床治疗的针对性和可预见性。

TNF-β和TNF-α基因参与免疫应答、炎症诱导、细胞信号转导、细胞凋亡等一系列活动。错配修复碱基酶分子1( hMLH1)参与修复DNA复制过程中的错配，保持DNA遗传的稳定性与完整性。

同样的原理，TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A和hMLH1基因上T1151A的单核苷酸多态性位点基因型可以作为胃癌发病的独立危险因素进行基因检测。

因此，建立简单、快速的胃癌易感基因无创检测方法，能够检测出人群胃癌发生相关的基因缺失多态和单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患胃癌的高危人群，有针对性的进行健康指导，对于保障人群安全健康、降低胃癌疾病的发生具有非常重要的意义。

发明内容

基于MTHFR基因上C677T、TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A、hMLH1基因上T1151A的4个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估胃癌发病风险级别，本发明提供一种胃癌基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测MTHFR基因上C677T、TNF-β基因上A252G、TNF-α基因上G-308A、hMLH1基因上T1151A的4个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；