[发明专利]香豆素木脂体类化合物的制备方法及其抗海洋污损方面的应用

说明书

1、技术领域

本发明涉及从锦葵科(Malvaceae)木槿属(Hibiscus)植物海滨木槿(Hibiscus hamabo Sieb.et Zucc.)中提取得到的一类香豆素木脂体类化合物及其制备方法，以及该类化合物抗癌、抗氧化和抗海洋污损方面的应用。本发明制备的海滨木槿活性成分含量明确，易于掌握有效剂量，用于制备抗癌、抗氧化及抗海洋污损产品时更为安全、稳定。

2、背景技术

锦葵科木槿属植物全世界200余种分布于热带和亚热带地区；我国有24种和16变种，分布于全国各地。本属植物多数供药用，对治疗跌打损伤、阴囊湿疹、皮肤癣、痢疾腹泻、痔疮出血、心脏和神经系统疾病以及各类炎症有良效。从木槿属植物的花、树皮、根及心材中分离得到的单体化合物类型有木脂素、黄酮、萜类、mansonones类、环肽、有机酸、香豆素和香豆素木脂体(主要活性成分)等，这些化合物的药理作用有抗炎抑菌、抗氧化、抗肿瘤和抗生育等。海滨木槿(Hibiscus hamabo Sieb.et Zucc.)系锦葵科(Malvaceae)木槿属(Hibiscus)落叶灌木或小乔木，20世纪80年代，由浙江农业大学范文涛教授采集该树的标本并将其定名为海滨木槿，又名海槿、海塘木、海塘树。有关海滨木槿的研究较少，且多数集中在引种、驯化方面，为了进一步发掘海滨木槿的内在功效，合理、可持续利用资源，提升综合利用附加值，本发明通过多种活性筛选实验发现海滨木槿活性提取物具有很好的抗癌、抗氧化和抗海洋污损作用。

3、发明内容

本发明的目的在于从海滨木槿中提取具有多种生物活性的有效部位，寻找最适剂量，减少用量且得到显著的效果，以提供一种海滨木槿活性成分制备抗癌的药品、抗氧化保健食品和抗海洋污损生物幼虫附着方面的方法和用途。

本发明明确了海滨木槿活性成分的组成和性质及用途，其特征是提取物中总酚酸类活性成分含量为30-90％，其中化合物A含量不低于3％。

本发明海滨木槿活性成分的制备方法具体为：

方法1：

(1)将海滨木槿或枝叶切成3～10公分每段，置于提取釜中，加入3～10倍生药体积的低级醇，低级醇为C1～C5醇类，其浓度为50～95％，提取温度为25～70℃，过滤得到滤液，并反复提取2～4次，合并滤液得到粗提取液；

(2)提取液减压浓缩后，溶于25～70℃水中，浸膏与水的体积比为1∶2～3，按1∶1～3体积加入石油醚萃取，除去亲脂性杂质；

(3)按1∶1～3体积加入乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩至无有机溶剂味的固体，得到活性成分部位，得率为0.8～3重量％。

方法2：

(1)将海滨木槿或枝叶切成3～10公分每段，置于提取釜中，加入3～10倍生药体积的低级醇，低级醇为C1～C5醇类，其浓度为50～95％，提取温度为25～70℃，过滤得到滤液，并反复提取2～4次，合并滤液得到粗提取液；

(2)粗提液浓缩至原来的1/3后，利用大孔吸附树脂吸附，用1倍柱体积的水洗去水溶性杂质，例如糖等，再用2倍柱体积的20％乙醇洗去大极性物质，改用30％～70％乙醇对其进行梯度洗脱，收集洗脱液；

(3)将洗脱液减压浓缩至无乙醇味固体，得到活性成分部位，得率为0.2％～2重量％。

上述方法2中所用的大孔吸附树脂为D101或HP-20或AB-8；上述方法1、2、3中所用的醇为无水或含水醇，所用石油醚、乙酸乙酯为分析纯。

将根据方法1、2得到的活性提取物进行常压硅胶柱层析，以氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮溶剂系统为洗脱剂，从体积比100∶0到0∶100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，将在薄层层析上能用体积比7∶3的氯仿-甲醇溶剂系统展开的组分，合并用体积比8∶2到7∶3的氯仿-甲醇溶剂系统进行梯度洗脱，收集在薄层层析上用体积比7∶3氯仿-甲醇溶剂系统展开时Rf值为0.3-0.5的组分分别合并，得到化合物A的粗产物，重结晶后得到最终产物。

本发明利用HPLC法测定化合物A的含量：

仪器与试剂

高效液相色谱仪Aglient 1100系列，四元泵，自动进样器，检测器：Aglient 1100UV，254nm下检测，色谱柱：Aglient Zorbax SB-C₁₈柱(250×4.6mm，5.0μm)，甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯。

色谱条件