[发明专利]一种降血压菜籽肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及涉及生物技术领域，具体涉及降血压菜籽肽及其制备方法和应用。

背景技术

我国是世界上油菜籽产量最大的国家，年产量已近1200万吨，菜籽粕是菜籽油加工的主要副产物，占菜籽总量的65%，其中含蛋白35% ~ 42%。菜籽蛋白氨基酸组成合理，赖氨酸、胱氨酸和蛋氨酸的含量较高，是一种优良的植物蛋白。开发利用菜籽蛋白质资源对有效利用我国的植物蛋白资源，提高我国人民的营养水平，具有重大的社会意义和良好的经济效益。

目前，我国约有2 亿高血压患者，每年仍然新增1000万人，开发新型降血压药剂和营养素，有利于解决这一日益严峻的社会公共问题。一方面，现有降血压药物长期服用会对身体造成很多的副反应，尤其是对消化道系统有很大的伤害；另外一方面，目前大多数降血压肽研究的靶标都是血管紧张素转移酶（ACE），但是，长期服用降血压药物ACE抑制剂，会激活血管紧张素系统（RAS）的旁路途径，从而影响高血压的临床治疗。而肾素抑制剂可以从源头阻断RAS系统，具有比ACE 抑制剂更多的潜在获益、更少的不良反应和更好的耐受性，并且在大型中间终点事件的研究中显示出具有靶器官保护的作用。但是，基于肾素抑制剂的降血压药物较少。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种酶法制备具有肾素抑制活性和ACE抑制活性的降血压菜籽肽的方法，该方法对环境友好，反应条件温和，能充分发挥蛋白酶对菜籽蛋水解作用，是一种低成本、适合工业化大批量制备菜籽降血压肽的方法。

本发明的另一目的在于提供降血压菜籽肽，不仅能够抑制血管紧张素转移酶（ACE），而且能够抑制肾素，可以阻断由于长期服用降血压药物ACE抑制剂激活的血管紧张素系统（RAS）的旁路途径。

本发明的另一目的在于提供降血压菜籽肽在制备治疗降血压药物方面的应用。

本发明提供一种制备降血压菜籽肽的方法,包括如下步骤:

（1）以粉碎后的菜籽粕为原料，将所述原料与水混合，调节pH值至6.5～9，温度35℃～50 ℃，搅拌分散0.5～2 h, 获得菜籽蛋白水溶液;

（2）向步骤(1)所述菜籽蛋白水溶液中,加入蛋白酶,在35℃～50 ℃下水解1～4 h,灭活其中的蛋白酶,离心取上清液，得降血压菜籽肽粗提液;

（3）将步骤(2)所述降血压菜籽肽粗提液精制后获得降血压菜籽肽。

步骤（1）所述菜籽粕的原料是普通油菜籽或双低油菜籽，粉碎后的菜籽粕的粒径为10～200μm。

步骤（1）所述菜籽蛋白水溶液的原料是从菜子粕中分离的蛋白质。

步骤（2）所述蛋白酶为蛋白酶 K、嗜热菌蛋白酶、复合蛋白酶或木瓜蛋白酶，优先蛋白酶 K。

步骤(2)所述加入的蛋白酶与菜籽蛋白水溶液中蛋白质的质量比为1～10:100。 

步骤(3)所述精制方法为: 降血压菜籽肽粗提液经截留分子量为3kDa的超滤膜超滤，取透过液透析脱盐，冷冻干燥得降血压菜籽肽。

步骤(3)所述精制方法也可以为: 将降血压菜籽肽粗提液经反相高效液相色谱分离，分别取有机溶剂体积浓度为10%~15%，35%~40% 和55%~60%的三部分洗脱液，将所述三部分洗脱液分别冷冻干燥，即得降血压菜籽肽；所述反相高效液相色谱分离的条件为：色谱柱为碳12或碳18硅胶柱；流动相为水和有机溶剂，所述有机溶剂为甲醇或乙腈，所述水和有机溶剂中均含有质量浓度为0.05～0.10%三氟乙酸；洗脱条件为：线性洗脱，流动相中的有机溶剂体积浓度从5%变化到80%。

本发明还提供采用上述方法制备的降血压菜籽肽。

本发明还提供采用所述降血压菜籽肽在制备降血压药物方面的应用。

本发明的有益效果：

（1）本发明制备降血压菜籽肽方法与现有的技术相比，直接以菜籽粕或者菜籽分离蛋白质为原料，通过酶法水解，获得降血压菜籽肽，原料来源广泛，生产工艺简单、成本低，而且变废为宝，有利于环境保护。

（2）采用两种精制方法获得的降血压菜籽肽，不仅能够抑制血管紧张素转移酶（ACE），而且能够抑制肾素，可以阻断由于长期服用降血压药物ACE抑制剂激活的血管紧张素系统（RAS）的旁路途径，在降血压方面有很大的开发前景。

（3）本发明降血压菜籽肽源于天然动、植物及微生物的降血压肽，除了具有降血压功能外，还有抗氧化、免疫促进、抗凝血、易消化吸收、对靶细胞无毒害作用等功能，是为降血压药物和营养素的首选原料。

具体实施方式