[发明专利]肠道病毒71型阜阳株及其减毒株的cDNA感染性克隆及应用有效
| 申请号： | 201210130398.1 | 申请日： | 2012-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN103374580A | 公开（公告）日： | 2013-10-30 |
| 发明（设计）人： | 岑山;张永欣;李晓宇;周永东 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/41 | 分类号： | C12N15/41;C07K14/085;C12N1/21;C12N7/01;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/93;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;王加岭 |
| 地址： | 100050 北京市西城区南*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肠道病毒 71 阜阳 及其 减毒株 cdna 感染性 克隆 应用 | ||
1.肠道病毒71型阜阳株的cDNA感染性克隆，其是通过反向遗传操作获得的肠道病毒71型阜阳株的cDNA感染性克隆。
2.根据权利要求1所述的cDNA感染性克隆，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的cDNA感染性克隆，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
4.含有权利要求1-3任一项所述肠道病毒71型阜阳株的cDNA感染性克隆的宿主细胞，其为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)FY/pBR322/DH5α，保藏号CGMCC No.5820。
5.肠道病毒71型阜阳株的减毒株的cDNA感染性克隆，其是通过反向遗传操作获得的肠道病毒71型阜阳株的减毒株的cDNA感染性克隆。
6.根据权利要求5所述的cDNA感染性克隆，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的cDNA感染性克隆，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
8.含有权利要求5-7任一项所述肠道病毒71型阜阳株的减毒株的cDNA感染性克隆的宿主细胞，其为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)ZD/pBR322/DH5α，保藏号CGMCC No.5819。
9.制备肠道病毒71型阜阳株及其减毒株的拯救病毒的方法，其特征在于，首先对肠道病毒71型阜阳株及其减毒株进行全基因组测序，根据测序结果设计用于构建cDNA克隆的引物和酶切位点，通过引物在基因组cDNA的5’端引入T7启动子，在其3’端引入polyA尾，然后分别以肠道病毒71型阜阳株及其减毒株的基因组为模板，进行RT-PCR反应，得到全长cDNA克隆，酶切线性化后进行体外转录，用体外转录出的RNA转染vero细胞，获得各自的拯救病毒。
10.权利要求1-3任一项所述肠道病毒71型阜阳株的cDNA感染性克隆及权利要求5-7任一项所述肠道病毒71型阜阳株的减毒株的cDNA感染性克隆在制备抗EV71病毒药物及疫苗中的应用。
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