[发明专利]一种鸡繁殖性状基因诊断试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种与鸡繁殖性状密切相关基因诊断试剂盒，其特征是：所述试剂盒包括GDF9基因PCR扩增的上下游引物混合物、PCR反应试剂和RFLP所需试剂；所述上下游引物混合物中上下游引物为：

GDF9上游引物序列  5'-CATACAATGGTGCAGAACATAATGTA- 3'；

GDF9下游引物序列  5'-ATTCTTTGTAGACTATGGAGCCATC-3'。

2.根据权利要求1所述的鸡繁殖性状密切相关基因诊断试剂盒，其特征是：所述PCR反应试剂为10×buffer，dNTP，rTaq酶。

3.根据权利要求1所述的鸡繁殖性状密切相关基因诊断试剂盒，其特征是：所述RFLP所需试剂为10×buffer，TaqⅠ内切酶。

4.一种使用权利要求1所述诊断试剂盒的方法，其特征是包括下列步骤：

1）PCR扩增SNP位点所在片段；

2）PCR产物的RFLP分型鉴定。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是：所述的PCR扩增SNP位点所在片段包括以下步骤：

1）PCR扩增反应体系准备：在PCR反应管中加入10×PCR缓冲液2.5 μL、10 μmol/L上下游引物混合物2.0 μL、2 mmol/L dNTPs 2.0 μL、5 U/μL Taq DNA聚合酶0.5 μL和50 ng/μL DNA模板1.0 μL，加超纯水至25 μL，充分混匀后短暂离心；

2）将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增：先94℃ 变性5min；再经过35个循环，每个循环包括94℃30s、63℃ 15s、72℃ 30s；然后72℃ 延伸10 min、最后4℃保存。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征是：所述的PCR产物的RFLP分型鉴定有以下步骤：

1）在PCR薄壁管中加入8.5μl PCR产物、2ul 10×buffer（内切酶配套）、内切酶 (TaqⅠ) 0.5ul和超纯水9 μl，充分混匀后短暂离心，然后放入37℃水浴锅中水浴6小时；

2）RFLP鉴定，酶切产物在3%琼脂糖凝胶，1×TBE，120 V电泳40分钟，用凝胶电泳成像系统显像。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征是：在PCR扩增反应结束后，取4μl反应产物在1.5％琼脂糖胶，1×TBE中电泳，检测扩增产物片段大小，以扩增产物片段为133 bp，判定PCR扩增片段是否正确。