[发明专利]一种吐根药材及其制剂中盐酸吐根酚碱和盐酸吐根碱的HPLC定量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种吐根药材及其制剂中盐酸吐根酚碱和盐酸吐根碱HPLC定量方法。

背景技术

吐根为茜草科植物Cephaelis ipecacuanha(Brot.)A.Rich.或Cephaelis acuminata Karsten的干燥根茎。是祛痰止咳药。是巴西、哥斯达黎加或印度进口药材，在美国药典(24版)和欧洲药典(7.0)都有收载。美国药典收载有吐根药材、吐根粉和吐根糖浆的质量标准，其含量测定是：分别测定吐根总生物碱、吐根碱和吐根酚碱的含量。总生物碱采用氯仿提取后，酸碱回滴定法测定总生物碱含量。吐根碱和吐根酚碱的含量测定则极其繁琐、费时，需用4根色谱柱，以不同的洗脱溶剂，经4次柱层析，将吐根碱和吐根酚碱分离后，采用差示分光光度法，分别在283nm和350nm波长处，测定吸收度A的差值，以ΔA计算含量。流程越长，待测成分的损失越多，导致方法的重现性与准确性越差。目前为止，还没查阅到有关吐根生物碱类，用高效液相定量测定的报道。

在美国药典(24版)和欧洲药典(7.0)的检测方法基础上，由进口厂家起草，中国药品生物制品检定所复核，制定了中国吐根药材的检验标准，含量测定仍然采用的是有机溶剂提取后，酸碱回滴定法测定总生物碱含量。样品取样量大，花费的有机溶剂多。不仅如此，原酸碱滴定方法，在供试品溶液的制备上存在着致命的缺陷。首先看滴定法的样品前处理程序“取吐根药材粉末7.5g，精密称定，加乙醚100ml，振摇5分钟，再加氨试液5ml，振摇1小时，加水5 ml，剧烈振摇，分出乙醚层，棉花过滤，滤液置烧瓶中，残渣用乙醚洗涤2次，每次25 ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加90％乙醇2ml使溶解，蒸干，并在100℃加热干燥5分钟，残渣加90％的中性乙醇5ml，水浴加热使溶解，精密加盐酸滴定液(0.1mol/L)15ml，加甲基红指示液1～2滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml盐酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.03mg的吐根碱(C₂₉H₄₀N₂O₄)。该处理程序不合理之处在于：

1)选择的提取溶剂乙醚，穿透力太弱，无法直接从植物细粉中将生物碱定量提取出来。

2)加少量氨试液的目的是为了使植物细胞中的生物碱游离，增大乙醚的穿透力，使生物碱易被乙醚提取出来，应先加氨试液，再加乙醚。可操作却是先加乙醚，再加氨试液，这样乙醚包覆了细粉，氨试液不能充分与细粉接触，乙醚的穿透力得不到提高，生物碱很难提取完全。

3)从植物细粉中提取生物碱，除了利用提取溶剂的相似相溶与强大穿透力之外，还要借助于外力，即加热或超声。原处理程序中的“振摇”操作，既无振摇频率，也无振摇强度和振摇次数，这样，“振摇”操作会因人而异，方法的重现性很难保证。

4)在吐根细粉、水和氨试液相互混合的乳状混合液容器中，如何在不更换容器的情况下，将乙醚提取液定量地与细粉分离又是影响方法准确性和重现性的因素。

5)“残渣加90％乙醇2ml使溶解，蒸干”，该操作是否更换容器，按字面意思，是不更换容器的，假若如此，该步操作的意义何在？

综上原因，原酸碱滴定方法不但操作程序长、乙醚用量大、污染环境，而且存在众多不确定因素，无法定量地将生物碱提取出来，也就无法准确地进行定量测定。

吐根流浸膏、吐根浸膏都是按中国药典2010年版一部附录IO项下的规定制备，吐根酊剂是按中国药典2010年版一部附录IN项下规定的乙醇稀释流浸膏制成。吐根流浸膏和吐根酊剂是小儿化痰止咳颗粒剂质量标准项下附带的原料制剂，其定量测定方法都是酸溶解，氯仿萃取除杂，再碱化，氯仿萃取生物碱后，蒸干，酸碱滴定，操作繁琐，污染环境，准确度难以保证。

在上述背景情况下，为简便、快捷、科学、准确、多指标控制吐根药材与其流浸膏、浸膏和酊剂的质量，发明了吐根药材及其制剂中盐酸吐根酚碱和吐根碱HPLC定量方法。

发明内容