[发明专利]植物内生真菌的分离方法

权利要求书

1.植物内生真菌的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)植物样品的表面消毒：将待分离内生真菌的植物样品表面进行消毒；

(2)内生真菌的分离：将经表面消毒的植物样品置于水琼脂平板培养基上，25℃黑暗条件下培养4-7天；

(3)菌种的纯化与保藏：将步骤(2)中培养得到的菌丝纯化，即为植物内生真菌，并于4℃保藏。

2.根据权利要求1所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：步骤(1)中，所述待分离内生真菌的植物样品由植物样品的采集及保存步骤制得，选用健康植物进行采集，采集部位包括树枝、茎干、树皮、叶、花或整体果实，所述树枝和茎干长度为10cm以上，所述树皮面积为3cm以上×3cm以上，无菌水冲洗后，即得待分离内生真菌的植物样品，将其存放无菌袋中于4℃保存。

3.根据权利要求1所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：步骤(1)中，所述待分离内生真菌的植物样品为软质样品或硬质样品。

4.根据权利要求3所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：将所述软质样品洗净，以有效氯含量为10％的次氯酸钠水溶液浸泡3min，无菌水洗涤3次，再以体积百分比为70％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水洗涤3次；将样品边缘部分去除，内部或中心部分切分成1cm×1cm大小的组织块。

5.根据权利要求3所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：将所述硬质样品切成1cm长的组织块，洗净，以质量体积百分比为0.2％升汞水溶液浸泡1min，无菌水洗涤3次，再以体积比为70％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水洗涤3次。

6.根据权利要求1所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述水琼脂平板培养基的配方为每1000ml水中含有20g琼脂。

7.根据权利要求1所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：步骤(3)中，挑取步骤(2)中培养得到的菌丝的尖端部分，移至马铃薯葡萄糖平板培养基上，25℃黑暗条件下培养4-7天；重复上述步骤4-5次直至得到纯菌落，即得植物内生真菌，挑取马铃薯葡萄糖平板培养基上的植物内生真菌的尖端部分移至马铃薯葡萄糖斜面培养基上，25℃黑暗条件下培养后4-7天，于4℃保存。

8.根据权利要求7所述的一种植物内生真菌的分离方法，其特征在于：所述马铃薯葡萄糖培养基的制备方法为：200g马铃薯加水煮沸30min，过滤即得马铃薯汁，加入20g葡萄糖及20g琼脂加热溶解，补足1000ml水即得。