[发明专利]泽泻致肾毒性作用毒效部位及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及泽泻致肾毒性作用毒效部位及其制备方法。

背景技术

泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis (Sam.)Juzep.的干燥块茎。首载于《神农本草经》，为临床常用药，历版《中国药典》均有收载。仅现行版药典中收载含有泽泻的中成药就有麦味地黄丸、七味都气丸、三宝胶囊、山菊降压片、五苓散、六味地黄丸、血脂灵片等20余种；除作为利水渗湿性中药，还被用作药膳、减肥保健品中，这使得它们得以被长期服用。但一直以来，人们只关注它的治疗功效，却忽略了其长期使用或过量使用后对肾脏造成的毒性作用。中药的毒性研究受限于科技发展水平和科研思路，古代中医学基于临床实践对中药毒性的描述多为笼统的和感性的，如大、中、小毒和上、中、下品（《神农本草经》）；而现代中药毒性研究的思路则长期以来一直参照化学药品毒性评价方法，研究手段主要集中在急性、亚急性和慢性毒性实验上，指标的选择以观察器官组织形态学的改变和某些生化指标的检测为主。这虽然为我们揭示了毒性的症状与程度，但对于现象和特征的描述无法达到从整体观点阐明由毒性所引起的内源性物质基础的变化规律，进而揭示中毒机理的目的。作为众多组学中的一种，代谢组学是通过考察生物体系受刺激或扰动后其代谢产物的变化来研究生物体系的一门学科。代谢组学将研究对象作为一个整体来研究的观点与中医药学整体观思维方式不谋而合，应用代谢组学的全面性系统策略来揭示中药毒性的规律，将有力地推动中医药的现代化进程。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了泽泻致肾毒性作用毒效部位及其制备方法、确认毒效部位的实验方法。

本发明所用的泽泻来自辽宁省医学材料有限公司。

本发明的技术方案是：

1、泽泻致肾毒性作用毒效部位是泽泻水煎液的氯仿萃取物。

2、泽泻水煎液的氯仿萃取物的制备方法是：首先将泽泻加入其重量8~12倍量的水，室温冷浸过夜，加热煮沸1~3次，每次提取0.5~2 h，过滤，合并滤液，减压浓缩得到泽泻水煎液提取物；其次，将浓缩后水煎液提取物，用氯仿等体积萃取2~4 次，合并萃取液，经旋转蒸发仪 50℃ ，蒸干溶剂，得到氯仿萃取物。

3、泽泻水煎液的氯仿萃取物的毒效确认方法：

（1）病理切片法：

取得到的氯仿萃取物，加水稀释至相当于药材浓度2 g/mL，作为氯仿萃取物供试液；

取关木通粉碎，加入4倍蒸馏水，浸泡30 min 后，加热至沸腾，煎煮60 min，倾出药液，过滤，反复煎煮2次，合并药液，过滤，浓缩至相当于药材浓度0.5 g/ml作为阳性对照溶液；按体重随机将动物平均分为3组：正常对照组，泽泻氯仿萃取物组和关木通阳性对照组，将大鼠放入代谢笼适应 7 天后每天灌胃一次，连续灌胃 120 天；于给药120天后将大鼠处死，肾脏称重，并取大鼠的肾组织用10％甲醛固定，石蜡包埋并作薄切片，制成 3 μm 切片，经苏木精-依红染色，在光学显微镜下观察形态学变化。

（2）代谢组学方法

取得到的氯仿萃取物，加水稀释至相当于药材浓度2 g/mL，作为氯仿萃取物供试液；

取关木通粉碎，加入4倍蒸馏水，浸泡30 min 后，加热至沸腾，煎煮60 min，倾出药液，过滤，反复煎煮2次，合并药液，过滤，浓缩至相当于药材浓度0.5 g/ml作为阳性对照溶液；按体重随机将动物平均分为3组：正常对照组，泽泻氯仿萃取物组和关木通阳性对照组，将大鼠放入代谢笼适应 7 天后每天灌胃一次，连续灌胃 120 天；

①生物样品的采集

尿液收集：采用代谢笼法，于给药120 天收集24 h尿液至离心管中，尿样13000 rpm离心3 min 后，取上清液置于-20 ℃冰箱中保存备用；

血清收集：于给药120天眼眶采血，置于试管中，放置30分钟，取出血饼，溶液13000 rpm离心5 min，分离得到血清置于-20 ℃冰箱中保存备用；

②代谢组学生物样品的预处理

尿样预处理：取尿样 200 μL，置于 1.5 mL EP 管中，加入 200 μL甲醇，涡旋 3 min，13000 rpm条件下离心 5 min，取上清液5 μL进行UPLC-MS分析；