[发明专利]从牛肺中提取肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品加工领域，特别涉及一种从牛肺中提取肝素钠的方法

背景技术

肝素钠是哺乳动物体内含的一种粘多糖，肝素钠与蛋白质结合一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内，肝素钠与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂、抗炎等多种生理恬性，是防治动脉粥样硬化、心脑血管疾病的显效药物。目前国内没有形成规模化的生产，主要是过滤困难，产品收率低，都是在沿用猪小肠生产肝素钠的传统方法，即树脂吸附、洗涤、洗脱和树脂再生处理，造成环境污染，而且生产成本高，产品产率低、效价低，这种方法很难规模化。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的缺陷提供一种从牛肺中提取肝素钠的方法。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案为：一种从牛肺中提取肝素钠的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制浆：将牛肺中大的气管和外部皮质脂肪剔除，将其绞碎，匀化成浆液，牛肺∶水＝1∶2-3，将pH调至9；

(2)酶解：将上述浆液加热至39-41℃，按浆液质量的1.5-3.5％加入蛋白酶，进行酶解3-4小时，监测PH的变化，控制pH为7.5-8.5，过滤酶解液，然后按浆液质量的0.5-1.5％加入肝素钠专用复合酶，将温度升到49-51度，控制pH为7.5-8.5，保温酶解3-3.5小时，监测酶解液效价不再变化酶解结束；

(3)灭酶：将步骤(2)得到的酶解液加入蛋白沉淀剂及NaCL，蛋白沉淀剂加入量为浆液质量的4-4.5％，NaCL加入量为浆液质量的1-2％，升温70-80℃，保温0.5-1小时，按浆液质量的0.5-1％加入氯化钙沉淀剂，沉淀1-2小时，将温度降至50℃；

(4)提纯：先经过自动过滤分离器进行一级提纯、其次经过粗滤器进行二级提纯、再经过细滤器进行三级提纯，最后经过精滤器进行四级提纯，得分离液；

(5)冻干燥：将上述分离液进一步浓缩，再冻干燥得肝素钠。

所述一级提纯是采用自动过滤分离器，将大于0.01毫米的机械杂质及颗粒蛋白除去，得到一级纯化分离液，并回收蛋白。

所述二级提纯是将一级纯化分离液加入到粗滤器中，清除大于0.09微米的杂蛋白，得到二级纯化分离液，定期从浓缩液中回收蛋白。

所述三级提纯是将二级纯化分离液加入到细滤器进行分离，清除其中大于0.03微米的杂蛋白，得到三级纯化分离液，定期从浓缩液中回收蛋白。

所述四级提纯是将三级纯化分离液加入到精滤器进行分离，清除微小分子蛋白、氨基酸、无机盐等，得到四级纯化分离液，定期从浓缩液中回收蛋白。

本发明的有益效果是：解决牛肺生产肝素钠时酶解液过滤困难，避免了长时间树脂吸附、洗涤洗脱和树脂再生等繁琐工序，同时克服了酸碱废液污染环境等问题，简化生产工艺，降低生产成本，提高产品的收率与质量，产品收率平均为4.2万u/kg肺，效价达70-120u/mg，减少环境污染，为规模化生产牛肺肝素钠提供有效生产保障。

附图说明

图1为本发明四级提纯流程图；

图中：1-酶解液高位储罐，2-自动过滤分离器，3a-二级循环桶，3b-三级循环桶，3c-四级循环桶，4a-二级增压泵，4b-三级增压泵，4c-四级增压泵，5-粗滤器，6-细滤器，7a-一号精滤器，7b-二号精滤器，7c-三号精滤器。

注：本发明涉及的四级提纯装置与本申请同日申请了实用新型专利。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1：见图1，一种从牛肺中提取肝素钠的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制浆：将牛肺中大的气管和外部皮质脂肪剔除，将其绞碎，匀化成浆液，牛肺∶水＝1∶2-3，将pH调至9；

(2)酶解：将上述浆液加热至39-41℃，按浆液质量的1.5-3.5％加入蛋白酶，进行酶解3-4小时，监测PH的变化，控制pH为7.5-8.5，过滤酶解液，然后按浆液质量的0.5-1.5％加入肝素钠专用复合酶，将温度升到49-51度，控制pH为7.5-8.5，保温酶解3-3.5小时，监测酶解液效价不再变化酶解结束；

(3)灭酶：将步骤(2)得到的酶解液加入蛋白沉淀剂及NaCL，蛋白沉淀剂加入量为浆液质量的4-4.5％，NaCL加入量为浆液质量的1-2％，升温70-80℃，保温0.5-1小时，按浆液质量的0.5-1％加入氯化钙沉淀剂，沉淀1-2小时，将温度降至50℃；