[发明专利]一种含LoxP-FRT重组酶位点的植物双元表达载体

权利要求书

1.一种载体，为环状双链DNA分子，自5’末端至3’末端依次包括大肠杆菌复制起始原点ColE1、农杆菌复制起始原点Rep-ori、调节蛋白Rep表达框、T-DNA超驱动区、T-DNA右边界、T-DNA左边界和Kan抗性基因表达框。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于：

所述大肠杆菌复制起始原点ColE1为序列表中序列4自5’末端第1-589位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述农杆菌复制起始原点Rep-ori为序列表中序列4自5’末端第590-1385位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述调节蛋白Rep表达框为序列表中序列4自5’末端第1386-2367位核苷酸所示的双链DNA片段。

所述Kan抗性基因表达框为序列表中序列4自5’末端第2448-3694位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述T-DNA超驱动区为序列表中序列4自5’末端第2368-2391位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述T-DNA左边界为序列表中序列4自5’末端第2423-2477位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述T-DNA右边界为序列表中序列4自5’末端第2392-2416位核苷酸所示的双链DNA片段。

3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：

在所述T-DNA右边界和所述T-DNA左边界之间还包括内酶切识别位点1；

所述内酶切识别位点1具体为MluI的识别位点。

4.根据权利要求1-3中任一所述的载体，其特征在于：

所述载体的核苷酸序列为序列表中的序列4。

5.根据权利要求1-3中任一所述的载体，其特征在于：

在所述T-DNA右边界和所述T-DNA左边界之间还包括含有植物筛选标记基因表达框的片段，

所述含有植物筛选标记基因表达框的片段自5’末端至3’末端依次包括多克隆酶切识别位点、右侧LoxP-FRT融合位点、植物筛选标记基因表达框和左侧LoxP-FRT融合位点。

6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于：

所述多克隆酶切识别位点为22个内切酶识别位点，所述22个内切酶识别位点自5’末端至3’末端具体依次为DraI识别位点、PmeI识别位点、NruI识别位点、识别位点甲、识别位点乙、EcoO109I识别位点、XhoI识别位点、PspXI识别位点、SalI识别位点、ClaI识别位点、HindIII识别位点、EcoRV识别位点、EcoRI识别位点、PstI识别位点、识别位点丙、BamHI识别位点、SpeI识别位点、NotI识别位点、AleI识别位点、SacI识别位点、MfeI识别位点、AgeI识别位点；

所述识别位点甲为KpnI位点或Acc651识别位点；

所述识别位点乙为ApaI位点或PspOMI识别位点；

所述识别位点丙为SmaI位点或XmaI的识别位点；

所述植物筛选标记基因表达框为NotII基因表达框、Hyg基因表达框或Bar基因表达框。

7.根据权利要求5或6所述的载体，其特征在于：

所述左侧LoxP-FRT融合位点为序列表中序列1自5’末端第4016-4083位核苷酸所示的双链DNA片段或序列2的自5’末端第4247-4314位所示的双链DNA片段或序列3的自5’末端第3773-3840位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述右侧LoxP-FRT融合位点为序列表中序列1自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的双链DNA片段或序列2的自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的双链DNA片段或序列3的自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述NptII基因表达框为序列表中序列1自5’末端第2650-4007位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述Hyg基因表达框为序列表中序列2自5’末端第2650-4238位所示的双链DNA片段；

所述Bar基因表达框为序列表中序列3自5’末端第2650-3764位所示的双链DNA片段。