[发明专利]一种同时富集五种食源性病原菌的培养基及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食源性病原菌的前增菌培养基，具体涉及一种同时对沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和志贺氏菌复合增菌的培养基及其制备方法。

背景技术

食源性疾病是全球最普遍的公共卫生问题。世界卫生大会2006年通过了关于食品安全的决议，该决议认为食源性疾病严重影响了世界人民的健康和幸福，并对个人、家庭、社区、工商企业和国家都造成了严重的经济损失[1]。其中，食品中污染的病原细菌是引起食源性疾病的主要因素之一，食物中毒暴发时，识别食源性病原菌至关重要[2]。

肠炎沙门氏菌，大肠杆菌O157，金黄色葡萄球菌，单核增生李斯特杆菌，志贺氏菌等已成为涉及到食源性疾病中最常见的细菌因子[3]。这些病原菌总是与受欢迎的食物如家禽产品、即食肉、乳品、和果蔬息息相关，有较高的发病率和死亡率，近年来爆发的几起食物中毒事件都涉及到它们[4]。在欧洲开展的调查鉴定出肉类是污染沙门氏菌、单核细胞增生李斯特杆菌、大肠杆菌O157的主要媒介[5]。金黄色葡萄球菌产生肠毒素也是公众关注的一个主要健康问题，金黄色葡萄球菌能在高盐环境中生长，高蛋白质食品中污染金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件时有发生[6]。志贺氏菌是人类细菌性痢疾的病原菌，主要通过动物性食品传播[7]。以上五种致病菌是目前我国保证多类食品安全的必检项目[8]。

检测食源性病原菌的传统方法是培养法，但操作繁琐，费时耗力，难以满足当今经济全球化食品快速流通的检测需要。另外，随着科学技术的发展和人们食品安全意识的增强，食品中需要检测的食源性病原菌种类也逐渐增多。因此，关于多种病原菌的同时、快速检测技术的研究已日渐深入[9-12]。先进的多重检测技术减少了处理大量样品所需的空间、时间和劳力，从而节约了检测单个病原菌的成本；而且，多重检测技术也是合理的，因为许多食品，如牛奶和乳品[13]、肉和家禽[14]以及水果和蔬菜[15]，往往是多种病原菌的携带者；另外，多重检测技术可以减轻食品工业和管理部门承担的检测高风险食品（易受病原菌污染的食品）的负担。

然而，在运用这些技术时必须考虑到影响检测的两个重要因素：第一，食品是经过加工、深加工、冷冻、包装、储藏等过程得到的，食品中的致病菌随着环境的改变，会受到损伤，活力下降。该情况下，应用PCR、基因芯片等分子生物学方法检测时准确率下降，为了防止带有致病菌食品的漏检，食品在检测前需要进行增菌。第二，许多现代检测方法的检测限都在10²～10⁴cfu/ml范围。低灵敏度意味着，当食品受污染程度低时，在运用免疫学和分子生物学技术检测目标菌之前必需进行增菌[16]。

可见，共增菌培养处理对于现代检测技术是必不可少的，该步骤的运用不仅能够增加样品中目标病原菌的浓度，还能修复受到生理压迫或损伤的细胞。通常，一种病原菌需要用一种或多种特殊的培养基来进行富集。如果同时检测多种病原菌就需要应用多种培养基分别进行富集, 使检测过程复杂繁琐。采用共增菌培养基进行同时富集则可简化操作。国内外现有研究中，涉及共增菌培养基技术的研究主要包括：沙门氏菌和志贺氏菌的共增技术[17]；沙门氏菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的共增技术（BSB）[18]；沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特杆菌的共增技术（SSL）[19]；沙门氏菌、大肠杆菌及单增李斯特杆菌的共增技术（SEL）[20]；沙门氏菌、副溶血性弧菌及霍乱弧菌的共增技术（SVV）[21]；能同时富集多种病原细菌的培养基包括通用预增菌培养肉汤（UPB）[22, 23]、蛋白缓冲水（BPW）、胰酶大豆肉汤（TSB）和营养肉汤（NB）[7,23]等。

迄今为止，未见关于同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特杆菌、大肠杆菌和志贺氏菌的共增菌培养技术的报道。为了满足背景微生物复杂情况时对特定目标病原菌进行性共增菌的要求，研究开发能同时富集五种病原菌的共增菌培养基，对实现同时检测多种病原菌具有重要的意义，是快速检测技术的重要前期技术平台。

发明内容

本发明旨在提供可以同时支持沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和志贺氏菌五种食源性病原菌同时生长的培养基，将常规检测方法中的前增菌步骤和选择性增菌步骤合二为一，用于同一平台检测多个病原菌，可以提高检测效率，节约检测成本。