[发明专利]一种复合益生菌发酵葡萄果汁粉的制备方法

权利要求书

1.一种复合益生菌发酵葡萄果汁粉的制备方法，其特征是按下述方法制备：

1）益生菌的选择及培养基的制备

A菌——两歧双歧杆菌CICC6168（Bifidobacterium  bifidum），培养基为：酪蛋白胨10g，肉汤提取物5g，酵母提取物5g，大豆蛋白胨5g，葡萄糖10g，吐温80 1ml，K₂HPO₄ 2g/L， MgSO₄×7 H₂O 0.2g/L， MnSO₄ x H₂O 0.05g/L，NaCl 5g，盐溶液 4ml，浓度为25mg/100ml刃天青4ml，蒸馏水950ml ，培养基煮至沸腾，添加半胱氨酸，调pH 至 6.8后，在CO₂下冷却至37℃备用。 其中盐溶液配方为：CaCl₂ × 2 H₂O 0.25g/L， KH₂PO₄ 1g/L，K₂HPO₄ 1g/L，MgSO₄×7 H₂O 0.5g/L， NaHCO₃ 10g/L ，NaCl 2g/L。

B菌——副干酪乳杆菌CICC20246 (Lactobacillus paracasei) ，培养基为：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二胺 2.0g，Tween 80 1.0g，K₂HPO₄ 2.0g，MgSO₄.7H₂O 0.2g，MnSO₄.H₂O 0.05g，CaCO₃ 20.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8，经121℃灭菌20分钟冷却至37℃备用。

C菌——鼠李糖乳杆菌CICC6142 (Lactobacillus rhamnosus) ，培养基为：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二胺 2.0g，Tween 80 1.0g，K₂HPO₄ 2.0g，MgSO₄.7H₂O 0.2g，MnSO₄.H₂O 0.05g，CaCO₃ 20.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8，经121℃灭菌20分钟冷却至37℃备用。

2）原菌种活化

分别量取0.9%的生理盐水10ml于3只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至37℃，将3株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在37℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

3）母发酵剂的制备

分别量取3株益生菌培养基各100ml于3只250mL三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至37℃，按培养基体积的10%接种2）步骤中已经活化的菌种，在37℃厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。

4）生产发酵剂的制备

首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液，分装于3只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至37℃，分别按3%体积比例接种母发酵剂，37℃厌氧培养48——54小时，检测3株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥10⁹个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜10⁹个/ml，继续培养，直至达到10⁹个/ml。

5）粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度0.8—1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。

6）复合益生菌发酵剂冻干粉的制备

按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3-4份，B菌粉末1-2份，C菌粉末2-3份，充分混匀后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵加糖浓缩葡萄果汁，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为加糖浓缩葡萄果汁中固形物重量的0.03%。

7）益生菌发酵葡萄果汁粉的制备

7.1）原料选择：选用新鲜葡萄，剔除病烂、病虫、生青果，用清水洗净。 

7.2）去梗：把葡萄果粒从梳子状的枝梗上取下来。

7.3）制取果汁：用滚筒式或离心式破碎机将果实压破。

7.4）过滤：用板框过滤机过滤，收集清汁。

7.5）浓缩：取7.4）步骤制备的清汁100公斤，采用低温减压浓缩工艺浓缩至30—35公斤，按浓缩后果汁中固形物重量的2.5%添加葡萄糖，完全溶解后制成加糖浓缩葡萄果汁。

7.6）灭菌：采用142℃3秒超高温瞬时灭菌机灭菌，冷却至37℃等待发酵。

7.7）复合益生菌发酵：按加糖浓缩葡萄果汁中固形物重量的0.03%添加6）步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，37℃厌氧发酵60小时。

7.8）冷冻干燥

将7.7）步骤发酵处理后的物料，打入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵葡萄果汁粉。