[发明专利]麻疹病毒和风疹病毒的特异性检测用引物探针组合和试剂盒

权利要求书

1.一种用于特异性检测样品中麻疹病毒和风疹病毒核酸的引物组合，这套序列组合特征在于包括下列引物：

P1：5`-GAAAGGTCAGTTCCACATTGGC-3`，

P2：5`-AACCGCTCTACTGATCCTGTCC-3`，

P3：5`-CGCCGCACGGACAACT-3`，

P4：5`-CTGATTGCCGGTGTAATTCATAAT-3`。

2.一种用于特异性检测样品中麻疹病毒和风疹病毒核酸的引物和寡核苷酸探针组合，其中引物为权利要求1所述的引物，寡核苷酸探针为：

Probe1：5`-X<sub>1</sub>-GGATGCAAGGCTTGTTTCAGAGATTGC-Y<sub>1</sub>-3`，

Probe2：5`-X<sub>2</sub>-GAGGTCCAGGTCCCGCCCGAC-Y<sub>2</sub>-3`。

X₁和X₂为荧光报告基团，Y₁和Y₂为荧光淬灭基团。

3.如权利要求2所述，这套序列组合特征还在于，其中Probe1荧光报告基团X₁为Fam，荧光淬灭基团Y₁为Eclipse，Probe2荧光报告基团X₂为Hex，荧光淬灭基团Y₂为Eclipse。

4.如权利要求2所述，这套序列组合特征还在于，可用于双重实时荧光聚合酶链反应检测，即一个反应体系可同时检测和鉴别麻疹病毒和风疹病毒核酸。

5.一种用于特异性检测样品中麻疹病毒和风疹病毒核酸的试剂盒，其中包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品。其特征在于PCR反应液中用于核酸扩增反应的引物序列如下：

P1：5`-GAAAGGTCAGTTCCACATTGGC-3`，

P2：5`-AACCGCTCTACTGATCCTGTCC-3`，

P3：5`-CGCCGCACGGACAACT-3`，

P4：5`-CTGATTGCCGGTGTAATTCATAAT-3`。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针的序列如下：

Probe1：5`-X<sub>1</sub>-GGATGCAAGGCTTGTTTCAGAGATTGC-Y<sub>1</sub>-3`，

Probe2：5`-X<sub>2</sub>-GAGGTCCAGGTCCCGCCCGAC-Y<sub>2</sub>-3`。

X₁和X₂为荧光报告基团，Y₁和Y₂为荧光淬灭基团。

7.如权利要求5所述的的试剂盒，其特征还在于PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针：其中Probe1荧光报告基团X₁为Fam，荧光淬灭基团Y₁为Eclipse，Probe2荧光报告基团X₂为Hex，荧光淬灭基团Y₂为Eclipse。

8.如权利要求5所述的的试剂盒，其特征还在于PCR反应体系为20μl，包括2×PCR缓冲液10μl、10mmol/L dNTP 1.0μl、25μmol/L引物各0.5μl、10μmol/L探针各0.2μl、逆转录酶和热启动Taq酶混合液0.8μl、样品DNA 2μl，加灭菌水至终体系20μl。

9.如权利要求5所述的的试剂盒，其特征还在于PCR反应循环参数为：

逆转录42℃，10min；95℃，10sec；进入循环阶段：95℃变性5s，60℃退火延伸1min，共反应40个循环。