[发明专利]烟草曲茎病毒卫星启动子无效
申请号: | 201210137324.0 | 申请日: | 2012-05-03 |
公开(公告)号: | CN102634519A | 公开(公告)日: | 2012-08-15 |
发明(设计)人: | 钱亚娟;张洁;周雪平;吴建祥 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/82 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人: | 张法高 |
地址: | 310027 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 烟草 病毒 卫星 启动子 | ||
1.一种烟草曲茎病毒卫星启动子,其特征在于:所述启动子DNA序列为烟草曲茎病毒alpha卫星分子的Rep ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4所示DNA序列。
2.一种DNA构建体,其特征在于包括烟草曲茎病毒alpha卫星分子的Rep ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4,以及与之进行可操作连接的有效基因,其中所述有效基因包括杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗病毒基因或其他抗微生物基因。
3.一种利用植物细胞表达杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗病毒基因或其他抗微生物基因的方法,其特征在于包括如下步骤:
(a)以可表达的方式将杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗病毒基因或其他抗微生物基因连接到烟草曲茎病毒alpha卫星分子的Rep ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4 DNA序列下游以获得重组DNA片段;
(b)将该重组DNA片段插入植物表达载体中;
(c)用上述重组表达载体转化植物细胞;
(d)培养该植物细胞表达杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗病毒基因或其他抗微生物基因。
4.一种利用植物细胞制备蛋白质的方法,其特征在于包括如下步骤:
(a)以可表达的方式将编码所需蛋白质的DNA连接到烟草曲茎病毒alpha卫星分子的Rep ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4 DNA序列下游,获得重组DNA片段;
(b)将重组DNA片段插入表达载体中,获得重组表达载体;
(c)重组表达载体经农杆菌或基因枪法转化植物细胞,培养转化的植物细胞以表达所需的蛋白质;
(d)从培养物中回收所需的蛋白质。
5.一种表达载体,其特征在于含有烟草曲茎病毒alpha卫星分子的Rep ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4 DNA序列,其中所述载体是适用于植物细胞的质粒载体、噬菌体或病毒等,所述载体能够插入杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗病毒基因或其他抗微生物基因。
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