[发明专利]一种检测犬细小病毒的生物条形码及其应用

权利要求书

1.一种用于检测犬细小病毒(Canine Parvovirus)的生物条形码，其具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列或其特异性片段。

2.用于扩增权利要求1所述生物条形码的特异性引物，其核苷酸序列为：

引物1：5’-CTTACACTGTTGCTGCTGCC-3’，

引物2：5’-TCCTCTACTTCGGGTGGGAA-3’。

3.与权利要求1所述生物条形码配合使用的互补探针NP链，其核苷酸序列为：

5’-TCCTCTACTTCGGGTGGGAAGTCGGGGTTCA₁₀-(CH₂)₆-SH-3’。

4.一种犬细小病毒的生物条形码检测方法，包括以下步骤，

1)NP探针的制备：用常规方法将金纳米颗粒、抗VP2蛋白的多克隆抗体、权利要求1所述的条形码DNA链和权利要求3所述的互补探针NP链制备NP探针；

2)MMP探针的制备：用磁性微球和抗VP2蛋白的单克隆抗体制备MMP探针；

3)犬细小病毒的生物条形码检测：利用NP探针、MMP探针和犬细小病毒通过抗原、抗体作用制备NP-VP2-MMP三明治复合物，然后在高温低盐条件下，释放条形码DNA链，最后对获得的条形码DNA链进行荧光定量PCR方法检测。

5.如权利要求4所述的生物条形码检测方法，其特征在于，步骤1)所述的金纳米颗粒直径为30nm。

6.如权利要求4所述的生物条形码检测方法，其特征在于，步骤2)所述的磁性微球直径为1μm。

7.如权利要求4-6任一所述的检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR方法所用引物如权利要求2所述。

8.一种犬细小病毒的生物条形码检测试剂盒，包括包被有抗VP2蛋白的单克隆抗体的MMP探针和抗VP2蛋白的多克隆抗体的NP探针。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述NP探针连接的条形码DNA链具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，互补探针NP链具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其还包括权利要求2所述的引物。