[发明专利]一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法

权利要求书

1.一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，包括以下步骤：

⑴外植体的选择和消毒处理：以宽叶羌活的根芽为外植体，经流水冲洗15~30分钟，用体积浓度为75%的酒精浸泡灭菌20~30秒，然后以无菌去离子水冲洗2~3次，再将冲洗后的外植体置于质量浓度为0.1%~0.2%的升汞中，浸泡灭菌8~13分钟，并用无菌去离子水冲洗3~6次，即得消毒后的外植体单芽；

⑵外植体接种：将所述消毒后的外植体单芽接种在诱导芽分化培养基上，其中每25ml所述诱导芽分化培养基中接种1棵所述消毒后的外植体单芽；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养25~30天，使根芽基部形成2~3个丛生芽；

⑶继代增殖培养：将所述2~3个丛生芽接种到继代增殖培养基上，其中每25ml所述继代增殖培养基中接种1棵所述丛生芽；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养25~35天，形成宽叶羌活丛生苗；

⑷生根诱导：将所述宽叶羌活丛生苗分株后转入生根培养基中，其中每25ml所述生根培养基中接种1棵所述宽叶羌活丛生苗；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养20~30天后，小苗基部出现白色、粗壮短根，并长出完整根系，即得完整再生小苗；

⑸育苗基质消毒：将育苗基质在115~121℃温度下进行高温消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基质；所述育苗基质是指腐殖质与珍珠岩按2：1重量比混合而成的混合基质；

⑹植株移栽：将所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常宽叶羌活植株；所述一棵完整再生小苗种植在所述消毒后的育苗基质10cm²的范围内。

2.如权利要求1所述的一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑴中的宽叶羌活的基源植物为伞形科多年生草本植物宽叶羌活。

3.如权利要求1所述的一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑵中的诱导芽分化培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，浓度为0.1mg/ml的6-苄氨基腺嘌呤母液5~20ml，浓度为0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。

4.如权利要求1所述的一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑶中的继代增殖培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，浓度为0.1mg/ml的6-苄氨基腺嘌呤母液5~20ml，浓度为0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。

5.如权利要求1所述的一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑷中的生根培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液50ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，浓度为0.1mg/ml的吲哚丁酸母液5~15ml，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。