[发明专利]Tβ4-EGF融合基因的制备及其应用

权利要求书

1.一种Tβ4-EGF融合基因的制备方法，其特征在于：根据人Tβ4基因库序列设计引物，以插入人Tβ4完整编码区基因的质粒pET-32a为模板进行PCR扩增；在T4DNA连接酶的作用下定向连接至载体pTXB1；再以重组质粒pTXB1-Tβ4为模板，设计引物，采用两步PCR法扩增获得Tβ4-EGF融合基因；所述引物含有Nde I和Xho I 酶切位点。

2.如权利要求1任一项所述的Tβ4-EGF融合基因的制备方法，其特征在于：所述PCR的反应条件为94⁰C预变性5分钟，95⁰C变性30秒，52⁰C退火30秒，72⁰C延伸30秒，扩增35个循环，再在72⁰C下反应10分钟，4⁰C 下反应10分钟。

3.一种Tβ4-EGF融合基因原核表达载体的构建，其特征在于：将权利要求1至2中任一项所得的Tβ4-EGF融合基因在T4DNA连接酶的作用下定向连接至载体pTXB1，并将连接产物导入 DH5α感受态细菌。

4.一种Tβ4-EGF融合蛋白的表达，其特征在于：将Tβ4-EGF融合基因原核表达载体导入感受态细菌E.coliBL21(DE3)，以IPTG诱导表达重组的人Tβ4-EGF融合蛋白。

5.如权利要求4所述的Tβ4-EGF融合蛋白的表达，其特征在于：将Tβ4-EGF融合蛋白经几丁质亲和层析柱纯化并DTT切割后得到纯化的Tβ4-EGF融合蛋白。