[发明专利]一种基于微悬臂梁的检测杀虫晶体蛋白Cry1Ab的方法有效
| 申请号： | 201210146515.3 | 申请日： | 2012-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN102778569A | 公开（公告）日： | 2012-11-14 |
| 发明（设计）人： | 吴骊珠;彭荣鹏;陈彬;佟振合 | 申请（专利权）人： | 中国科学院理化技术研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 张文祎 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 悬臂梁 检测 杀虫 晶体蛋白 cry1ab 方法 | ||
1.一种基于微悬臂梁的检测杀虫晶体蛋白Cry1Ab的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
将带金膜的微悬臂梁进行前处理，浸入巯基化试剂的醇类溶液中，清洗；
将微悬臂梁浸入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液中，清洗；
将微悬臂梁浸入杀虫晶体蛋白Cry1Ab抗体的生物缓冲溶液中，静置；
将上述修饰有Cry1Ab抗体的微悬臂梁用于对杀虫晶体蛋白Cry1Ab的检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述巯基化试剂为11-巯基十一烷酸、6-巯基己酸或3-巯基丙酸，浓度为1×10-4M~1×10-3M。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浸入巯基化试剂的醇类溶液中的条件为：时间为12h~24h，温度为15℃~37.5℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理为：在浓H2SO4/30%H2O2的混合溶液中浸泡1min；所述浓H2SO4∶30%H2O2物质的量的比值为7∶3。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理还包括用去离子水清洗，氮气吹干。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的浓度为10mg/ml~100mg/ml；所述N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为10mg/ml~100mg/ml；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的体积比为1~5∶1；所述浸入的反应时间为0.5h~4h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述杀虫晶体蛋白Cry1Ab抗体的浓度为0.1mg/ml~1mg/ml。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为4h~8h。
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