[发明专利]一种玉米单倍体加倍方法

权利要求书

1.一种植物单倍体加倍方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)切除植物单倍体幼芽胚芽鞘尖端；

2)用秋水仙素和二甲基亚砜的混合液浸泡所述切除胚芽鞘尖端的植物单倍体幼芽的胚芽部分，通过该部分浸泡措施，得到染色体加倍的幼芽。

2.如权利要求1所述的单倍体加倍方法，其特征在于，所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

3.如权利要求1或2任意一项所述的单倍体加倍方法，其特征在于，所述秋水仙素和二甲基亚砜混合液中，秋水仙素的终浓度为：0.4-0.8mg/mL，二甲基亚砜终浓度为1％-5％；秋水仙素混合液的使用量为：300-1000μl。

4.如权利要求1或2任意一项所述的单倍体加倍方法，其特征在于，所述浸泡步骤中，仅留单倍体幼芽的胚芽部分浸泡在混合液中，幼芽根部露在混合液外。

5.一种玉米单倍体加倍方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)切除玉米单倍体幼芽胚芽鞘尖端；

2)将已经切除了胚芽鞘尖端的幼芽倒着放入离心管中，用秋水仙素配以二甲基亚砜的混合液浸泡所述切除胚芽鞘尖端的玉米单倍体幼芽的胚芽部份，通过该部分浸泡措施，得到染色体加倍的玉米幼芽。

6.如权利要求5所述的玉米单倍体加倍方法，其特征在于，所述用秋水仙素混合液浸泡过程中，每个离心管中加入300-1000μL0.4-0.8mg/mL的秋水仙素溶液，所述秋水仙素溶液中还配有终浓度为1％-5％的二甲基亚砜；将已经切除胚芽鞘尖端的幼芽根部朝上倒着放进离心管中，使幼芽的胚芽部分浸泡在秋水仙素溶液中，而幼芽根部露在外面，整个操作过程要求在18-25℃之间进行，浸泡6-10h。

7.如权利要求5或6任意一项所述的玉米单倍体加倍方法，其特征在于用秋水仙素混合液浸泡过程中，为了防止幼芽根部脱水，用湿纸巾或湿毛巾覆盖幼苗根部。

8.一种玉米单倍体加倍方法，由下述步骤组成：

1)种子发芽：将单倍体种子清洗干净，均匀地摆放在铺有湿毛巾的发芽盘中，放置在20-28℃的适宜环境中暗光培养3-5天，并及时补充水分；

2)胚芽鞘顶端切除：待玉米单倍体幼芽长至1-3cm时，切除玉米单倍体幼芽的胚芽鞘尖端且不损伤真叶和生长点，得到切除胚芽鞘尖端的玉米单倍体幼芽；

3)幼芽浸泡：取离心管，在每个离心管中加入300-1000μL秋水仙素混合溶液，其中含终浓度为0.4-0.8mg/mL的秋水仙素和1％-5％的二甲基亚砜，将已经切除胚芽鞘顶端的幼芽倒着放进离心管中，使幼芽的胚芽部分浸泡在秋水仙素溶液中，而幼芽根部露在外面，为了防止幼芽根部脱水，用湿纸巾或湿毛巾覆盖幼苗根部，整个操作过程要求在18-25℃之间进行，浸泡6-10h；

4)清水冲洗：将幼芽从离心管中取出，放进发芽盒中，并立即用清水冲洗，随后将废弃的秋水仙素溶液倒进固定的废液桶中并处理，清水冲洗时间1小时以上；

5)缓苗：将幼芽移栽在育苗钵中，并放置在阴凉通风处进行缓苗，缓苗期间注意适时适量浇水，缓苗期间温度20-28℃；

6)移栽：待幼苗长至2-3叶期的时候，及时将其移栽在试验田中；移栽前，向育苗钵中浇足量的水分，使营养土能够凝成一团，不至于从幼苗上脱落；然后将其移栽在条穴中，移栽后，及时大量浇水，确保成活；待苗情稳定之后，参照大田模式进行田间管理。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤3)所述秋水仙素混合溶液中，含终浓度为0.6mg/mL的秋水仙素和2％的二甲基亚砜。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤3)所述整个操作过程温度为22-25℃，浸泡时间为8-10h。