[发明专利]骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法

权利要求书

1.骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，其为将骨髓来源单个核细胞悬液在体外用培养基培养，其特征在于：在加入培养基培养前，还包括骨髓来源单个核细胞悬液的预处理步骤，具体为：将所述骨髓来源单个核细胞悬液用滤孔为40～75μm的滤器过滤，取过滤液进行培养。

2.根据权利要求1所述的骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，其特征在于：所述培养基为含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基。

3.根据权利要求2所述的骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，其特征在于：将所述骨髓来源单个核细胞悬液用滤孔为40～75μm的滤器过滤，将过滤液在1000～1500rmp/min条件下离心不多于10分钟，去上清液，用含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基重悬细胞制备单个核细胞悬液。

4.根据权利要求2所述的骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，其特征在于，含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基中含巨噬细胞集落刺激因子的浓度为20ng/ml。

5.根据权利要求4所述的骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，具体包括以下步骤：

A骨髓来源的细胞混合液的制备

用注射器吸取PBS缓冲液插入离体动物股骨两端的软骨处冲出股骨内的骨髓，收集骨髓来源的细胞混合液；

B单个核细胞悬液的制备

将步骤A所得的收集骨髓来源的细胞混合液混悬，得骨髓来源的单个核细胞悬液，用滤孔为40～70μm的滤器过滤，将过滤液在1000～1500rmp/min条件下离心5～10分钟，去上清液，用含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基重悬细胞，制备细胞重悬液；

C第一阶段细胞培养

将步骤B所得细胞重悬液调节调节成浓度为1-2×10⁶个/mL，置于培养箱中37℃、5％孵育24～30小时后，吸弃上清，另加入所述含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基，再培养48小时；

D第二阶段培养

在第一阶段细胞培养完成后，不超过24小时对培养的细胞进行换液，另培养3～4日，得分化成熟的巨噬细胞。