[发明专利]一种预防和治疗肿瘤的效应细胞组合及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，特别涉及一种预防和治疗肿瘤的效应细胞组合及其制备方法。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见病和多发病，世界恶性肿瘤的发病率逐年迅速增高，2005年国家卫生部公布：癌症的死亡人数已跃居中国城乡居民的十大死因之首，而肿瘤的治疗却任重而道远。美国政府把“向癌症宣战”作为基本国策之一，15年中投资25亿美元。但是肿瘤的防治结果并不令人满意，20年后，美国总统委员会总结“向癌症宣战”的结果是：肿瘤的5年生存率提高了4%，但是肿瘤的发病率却提高了7%。所以恶性肿瘤的临床治疗仍是世界各国医务工作者的艰巨任务。

国内外均以手术、放疗和化疗作为肿瘤治疗的主要手段，但总体疗效不尽人意。临床上70%的恶性肿瘤患者是死于肿瘤的复发和转移。要彻底清除三大常规治疗后机体内残存的少量肿瘤细胞，才是防止肿瘤复发和转移的关键。要彻底清除体内残留的肿瘤细胞，只有靠机体的免疫系统，也就是说要消灭掉体内最后一个肿瘤细胞要靠病人自己。近年来，肿瘤生物治疗已成为肿瘤综合治疗中第四种模式，而且越来越受到人们的重视。

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer,CIK）已成为恶性肿瘤过继免疫治疗的研究热点。CIK细胞是将人外周血或骨髓的单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又被称为NK样T淋巴细胞，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点，是继LAK，TIL及CD3AK细胞之后又一高效的免疫效应细胞。

目前，自体CIK细胞作为新一代肿瘤过继免疫治疗方法已经普遍用于肿瘤的临床治疗。然而，肿瘤患者进行自体CIK细胞过继性免疫治疗，绝大多数患者临床疗效未尽人意，资料表明CIK细胞治疗各种恶性实体瘤的有效率在3.9%-30%之间，平均在30%以下，初步临床结果显示CIK能使少数病例完全缓解，绝大多数病情仅部分缓解。

然而，利用自体CIK细胞治疗肿瘤却存在如下缺点：

①有部分患者，我们的临床经验是大约40%的晚期瘤患者，其外周血CIK细胞不能诱导成功。原因是这些患者年龄较大（临床上60%的肿瘤患者都是60岁以上的老人），自身细胞的繁殖能力较差。再加上经过漫长的化学药物和放射治疗，对其本身的血液细胞和免疫能力有进一步损伤，固临床上有40%的患者不能培养出自体的CIK细胞。

②即使能勉强培养出自体CIK细胞，其CIK细胞的扩增倍数和杀伤活性也明显不足。我们的临床经验表明，同样培养14天时肿瘤患者CIK扩增倍数为60-100倍，而健康人CIK可扩增到360-800倍。健康人CIK的杀伤活性（92.7%）也明显高于肿瘤患者CIK的杀伤活性（64.2%）。

③这也是最重要的和最核心的一个缺点。这就是肿瘤患者自体的肿瘤细胞对自体的免疫细胞已形成了“免疫逃逸”，而躲开自身免疫细胞的杀伤而恶性发展；而肿瘤患者的免疫细胞对自体的肿瘤细胞产生了“免疫耐受”，见到肿瘤细胞或“视而不见”，或“视为朋友”而不发挥免疫杀伤作用，这样自体免疫细胞对自体肿瘤细胞失去了杀伤作用，才导致肿瘤细胞的恶性发展。

这种理论，目前医学上叫“肿瘤免疫编辑”。具体的内容如下：

为什么健康人CIK细胞效果优于患者自体CIK细胞？郭坤元教授的一项研究说明了患者自身CIK细胞疗效不理想的原因。他把健康人的NK细胞和红白血病的癌细胞K562按1：1的比例进行共同培养，检测NK细胞对K562细胞的杀伤作用。结果是正常NK细胞对K562的杀伤活性为54.3%。他把“服过役”的NK细胞和K562细胞的“残存者”再共培养检测“服过役”的NK细胞对K562细胞的“残存者”的杀伤作用。结果：原代NK细胞对K562细胞的“残存者”杀伤活性为54%，“服过役”的NK细胞对K562细胞的“残存者”的杀伤活性仅有16%。也就是说：当免疫细胞和肿瘤细胞第一次战斗时，NK的杀伤活性为54%，这二种细胞第二次战斗时，NK的杀伤活性仅有16%，不足第一次的30%。这说明，NK细胞和肿瘤细胞第二次“见面”时，其杀伤活性降低了70%强。