[发明专利]一种鱼类小清蛋白荧光标记抗体、制备方法及其用途无效

专利信息
申请号: 201210153421.9 申请日: 2012-05-17
公开(公告)号: CN102680674A 公开(公告)日: 2012-09-19
发明(设计)人: 曹敏杰;沈建东;蔡秋凤;刘光明;苏文金 申请(专利权)人: 集美大学
主分类号: G01N33/533 分类号: G01N33/533
代理公司: 厦门市诚得知识产权代理事务所 35209 代理人: 方惠春
地址: 361000 福*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 一种 鱼类 蛋白 荧光 标记 抗体 制备 方法 及其 用途
【说明书】:

技术领域

发明涉及一种抗体,尤其涉及一种鱼类主要过敏原小清蛋白荧光标记抗体、制备方法及其用途。

背景技术

鱼类由于含有丰富的不饱和脂肪酸和脂溶性维生素,是人类重要的食物来源。但是,鱼类同时也是八大类致敏食物之一,在沿海国家因食用鱼类导致过敏的事件时有发生。鱼类中的主要过敏原之一是小清蛋白,如何快速、准确、安全的进行过敏原小清蛋白的检测就越发显得重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是:提供一种快速、准确、安全的检测鱼类小清蛋白的荧光标记抗体。

为实现上述目的,本发明提供一种鱼类小清蛋白荧光标记抗体,具体为藻红蛋白与鱼小清蛋白单克隆抗体组合而成。其中的藻红蛋白与鱼小清蛋白单克隆抗体均分别进行了处理;藻红蛋白通过SPDP处理;鱼小清蛋白单克隆抗体通过2-IT处理。

所述的鱼类小清蛋白荧光标记抗体制备方法包括如下步骤:

藻红蛋白的处理:藻红蛋白与SPDP进行混合后,恒温摇床100 rpm/min ,25℃避光反应45 min,过脱盐柱去除多余SPDP,用Millipore 10 kDa的超滤浓缩管离心;藻红蛋白与SPDP的摩尔比为1:80;

鱼小清蛋白单克隆抗体的处理:鱼小清蛋白单克隆抗体与2-IT进行混合后,恒温摇床100 rpm/min,25℃避光反应45 min,过脱盐柱去除多余的2-IT,用Millipore 10 kDa的超滤浓缩管离心;鱼小清蛋白单克隆抗体与2-IT的摩尔比为1:100;

藻红蛋白与鱼小清蛋白单克隆抗体的混合反应:将处理后的藻红蛋白与处理后的鱼小清蛋白单克隆抗体在一定温度下避光反应;反应条件为25℃下避光反应16 h;

收集:将反应后的样品上样于高效液相色谱,根据分子量收集标记部分。

 本发明还包括由上述方法制备得到的鱼类小清蛋白荧光标记抗体。

鱼小清蛋白单克隆抗体优选为抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体。

本发明还提供了鱼类小清蛋白荧光标记抗体的用途,优选为检测鱼类小清蛋白的用途,更优选为检测鲢鱼小清蛋白的用途。

本发明的鱼类小清蛋白荧光标记抗体的制备过程为SPDP(3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羧基琥珀酰亚胺酯)(21857,Thermo)与藻红蛋白的反应,2-IT(2-亚氨基四氢噻吩)(26101,Thermo) 与抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体反应,再两者混合反应得到。

本发明的鱼类小清蛋白荧光标记抗体既能实现对小清蛋白的快速检测,又可用于免疫荧光检测、Western blot等分析。

本发明所述的鱼类,不仅包括淡水鱼,也包括海水鱼。比如鲢鱼、鲫鱼、鲤鱼、罗非鱼、草鱼、巴浪鱼、鲷鱼、鳗鱼、鲆鱼等。

采用本发明的鱼类小清蛋白荧光标记抗体进行鱼类小清蛋白的检测的主要优势:

1、相对于传统化学发光检测,这种方法更安全。传统的化学发光有用DAB(二氨基联苯胺)和ECL(底物化学发光)显色的,但是所用的试剂会有一定毒性;而利用荧光标记检测,利用了藻红蛋白的天然荧光和无毒性的特点,避免了显色过程中带来的不安全因素;

2、与其他检测方法,这种方法大大缩短了检测的时间。藻红蛋白标记一抗检测,与传统方法相比较,因其不需要二抗反应和显色,大大缩短了检测的时间,提高了效率;

3、与传统的检测方法比较,该荧光标记抗体有利于提高检测的特异性。藻红蛋白标记一抗与抗原反应后,直接在荧光成像仪上记录结果,可直接避免由二抗带来的非特异性反应。

附图说明

图1为应用鲢鱼小清蛋白荧光标记抗体采用Dot blot法检测不同浓度的鲢鱼小清蛋白。

图2为应用鲢鱼小清蛋白荧光标记抗体通过Western blot检测不同浓度的鲢鱼小清蛋白。

图3为应用鲢鱼小清蛋白荧光标记抗体与鲢鱼小清蛋白的免疫荧光检测试验。

图4为应用鲢鱼小清蛋白荧光标记抗体与鲢鱼小清蛋白的Western blot试验。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。

 实施例1:鲢鱼小清蛋白荧光标记抗体的制备。

1、鲢鱼小清蛋白的纯化

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