[发明专利]含有乙脑E蛋白C末端中和表位基因的融合蛋白及其疫苗

权利要求书

1.一种分离的乙脑E蛋白C末端的中和表位基因，其基因序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述的基因编码的一种分离的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种融合蛋白，由乙脑E蛋白C末端的中和表位基因和M.T hsp70基因构成，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

4.一种编码权利要求3所述的融合蛋白的基因，其基因序列如SEQ ID NO：3所示。

5.一种载体，其特征在于：含有权利要求1或4所述的基因序列。

6.一种工程菌，其特征在于：含有权利要求1或4所述的基因序列。

7.如权利要求5所述的载体，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO：5所示。

8.权利要求5所述的载体表达的蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

9.一种用于预防乙脑的疫苗，其特征在于：含有权利要求2或者3所述的蛋白、或者权利要求5所述的载体表达的蛋白。

10.一种用于预防乙脑的疫苗，其特征在于：含有权利要求6所述的工程菌。

11.权利要求5所述的载体的制备方法，其特征在于：包括一个人工合成乙脑E蛋白C末端的中和表位基因的步骤，一个将中和表位基因克隆到原核表达载体上的步骤，一个扩增hsp70基因的步骤，一个将hsp70基因克隆入原核表达载体中中和表位基因下游、得到融合蛋白表达载体的步骤，一个将融合蛋白表达载体在大肠杆菌中的表达的步骤，一个将表达蛋白纯化的步骤。

12.如权利要求11所述的载体的制备方法，其特征在于：在一个人工合成乙脑E蛋白C末端的中和表位基因的步骤中，以SEQ ID NO：7所示的序列为正义链，以SEQ ID NO：8所示的序列为反义链，合成乙脑E蛋白C末端的中和表位基因。

13.如权利要求11所述的载体的制备方法，其特征在于：在一个将中和表位基因克隆到原核表达载体上的步骤中，将中和表位基因以EcoRⅠ和Hind                                               酶切后，克隆到原核表达载体pET-32a（+）上，构建表达载体pet-32a-epitope。

14.如权利要求11所述的载体的制备方法，其特征在于：在一个扩增出hsp70基因的步骤中，以人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板，扩增出M.T hsp70基因，扩增M.T hsp70的上游引物序列如SEQ ID NO：9所示，下游引物序列如SEQ ID NO：10所示。