[发明专利]多血清型口蹄疫病毒3C基因特异性siRNA筛选与应用无效
申请号: | 201210154168.9 | 申请日: | 2012-05-17 |
公开(公告)号: | CN102732519A | 公开(公告)日: | 2012-10-17 |
发明(设计)人: | 张立春;赵玉民;金海国;曹阳;于永生;闫晓刚;王晓阳;朴庆林;吕礼良;刘晓辉 | 申请(专利权)人: | 吉林省农业科学院 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12Q1/68;A61K48/00;A61P31/14;A01K67/00 |
代理公司: | 长春吉大专利代理有限责任公司 22201 | 代理人: | 邵铭康;朱世林 |
地址: | 130030 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 血清 口蹄疫病毒 基因 特异性 sirna 筛选 应用 | ||
1.一组能特异性抑制O型、A型和Asia I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA,其特征在于以口蹄疫基因组3C基因为干扰靶点,其序列分别为siRNA1-3C、siRNA2-3C、siRNA3-3C以及A型和Asia I型口蹄疫病毒基因组中对应的靶序列。
2.根据权利要求1所述的一组能特异性抑制O型、A型和Asia I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA,其设计与筛选方法包括下列步骤:
1)比对分析所有O型、A型和Asia I型口蹄疫病毒分离株3C基因核苷酸序列,找出三种血清型3C基因序列的保守区,在此区域内设计siRNA;
2)人工合成O型、A型和Asia I型三株口蹄疫病毒3C基因部分片段;
3)构建用于表达EGFP-3C融合基因的真核表达载体;
4)将真核表达载体与siRNA共转染HEK293T细胞;
5)荧光显微镜观察检测EGFP荧光及实时定量RT-PCR法检测EGFP-3C基因mRNA表达,综合验证siRNA对3C基因的抑制效率。
3.一种如权利要求1所述一组能特异性抑制O型、A型和Asia I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA在抗多血清型口蹄疫病毒药物及抗多血清型口蹄疫病毒转基因动物中的应用。
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