[发明专利]一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法

权利要求书

1.一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法，包括如下步骤：

（1）猴头菌培养物溶液的制备：猴头菌培养物经粉碎，过筛，以适量水溶解，振摇2~4小时，滤过，定容。

（2）吸光度测定：精密量取1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml置具塞刻度试管中，精密加猴头菌培养物溶液0.5ml，混匀，置45~55℃水浴中保温25~35分钟，取出，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温5~15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1~2小时，以空白管进行调零，在540nm波长处测定吸光度。空白管加1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml，置45~55℃水浴中保温25~35分钟，取出，精密加猴头菌培养物溶液0.5ml，混匀，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温5~15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1~2小时。

（3）计算羧甲基纤维素酶活力：从葡萄糖标准曲线上读出猴头菌培养物溶液中还原糖的重量（mg），按照下式计算羧甲基纤维素酶活力：

U=A×1/0.5×n×2

式中 U——每1g含酸性羧甲基纤维素酶活力单位，U/g；

A——吸光度在标准曲线上查得的还原糖重量，mg；

n——样品稀释倍数；

2——时间换算系数。

1g固体酶在50±1℃、pH4.8条件下，1小时水解1%羧甲基纤维素钠底物，产生出相当于1 mg葡萄糖的还原糖量为一个酸性羧甲基纤维素酶活力单位，以U/g表示。

2.如权利要求1所述的羧甲基纤维素酶活力的测定方法，其特征在于步骤（3）所述的葡萄糖标准曲线测绘方法为：分别精密量取0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml、0.8 mg/ml、1.0mg/ml的葡萄糖对照品溶液1.5ml，置具塞刻度试管中，各精密加pH4.8柠檬酸盐缓冲液0.5ml，混匀，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温5~15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1~2小时，以相应的试剂为空白，在540nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖量为横坐标，绘制标准曲线。

3.如权利要求1所述的羧甲基纤维素酶活力的测定，其特征在于上述具塞刻度试管容积为25ml。

4.如权利要求1所述的羧甲基纤维素酶活力的测定，其特征在于上述猴头菌培养物溶液为8~10 mg/ml，且临用新制。

5.如权利要求1所述的羧甲基纤维素酶活力的测定，其特征在于上述羧甲基纤维素钠溶液的配置方法是精密称取1.0g羧甲基纤维素钠，置具塞锥形瓶中，精密加入pH4.8柠檬酸盐缓冲液80ml，称定重量，85±5℃边加热边磁力搅拌至完全溶解，放冷，再称定重量，用pH4.8柠檬酸盐缓冲液补足减失的重量，摇匀，以3mol/l盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH至4.8，转移至100ml量瓶中，加pH4.8柠檬酸盐缓冲液至刻度，摇匀，即得1%羧甲基纤维素钠溶液。

6.如权利要求1所述的羧甲基纤维素酶活力的测定，其特征在于，上述DNS试剂的配置方法是取结晶酚6.9g，加10%氢氧化钠溶液15ml溶解后，加水稀释至70ml，摇匀，再加入6.9g亚硫酸氢钠，即得DNS甲液。取酒石酸钾钠255g，加10%氢氧化钠溶液300ml溶解后，再加入1%3,5-二硝基水杨酸880ml，摇匀，即得DNS乙液。取上述甲液与乙液混合，摇匀，置玻璃塞的棕色玻瓶中，4℃放置7天后使用。