[发明专利]灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法有效
申请号: | 201210155168.0 | 申请日: | 2012-05-18 |
公开(公告)号: | CN102766179A | 公开(公告)日: | 2012-11-07 |
发明(设计)人: | 罗晓星;龙祥;李永伟;王海燕;张秋玲;胡志祥 | 申请(专利权)人: | 云南施普瑞生物工程有限公司 |
主分类号: | C07H17/07 | 分类号: | C07H17/07;C07H1/08;C07D311/30;C07D311/40;C07C69/732;C07C67/56 |
代理公司: | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 11280 | 代理人: | 郭广迅 |
地址: | 650106 云南省昆*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 灯盏 细辛 有关 物质 提取 分离 方法 | ||
1.一种灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法,所述提取分离方法包括以下步骤:
1)提取工艺:取灯盏细辛酚,加乙醇溶液溶解,制成供试品;
2)分离工艺:将步骤1)中制得的供试品进行柱层析,先用水洗脱,再用乙醇溶液洗脱,然后再用乙酸乙酯萃取,分别得到下层的乙醇提取液即A组分和上层的乙酸乙酯萃取液即B组分;
3)再将步骤2)制得的A组分和B组分分别通过高压液相色谱仪分离,其中A组分得到1、2号化合物,B组分得到3、4、5、6号化合物;
4)利用核磁共振氢谱和碳谱鉴定1-6号化合物,所述1号化合物为灯盏甲素;所述2号化合物为芹菜素;所述3号化合物为3,4-二咖啡酰基奎宁酸;所述4号化合物为1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸;所述5号化合物为3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸;所述6号化合物为飞蓬酯乙乙酯;
5)根据已建立的灯盏细辛酚的指纹图谱,计算步骤4)鉴定的所述六个化合物的峰分别占灯盏细辛酚的指纹图谱总峰面积的百分比,从而分别得出所述六个化合物在灯盏细辛酚中质量百分比分别为,灯盏甲素:1.51%以下、芹菜素:1.30%以下、3,4-二咖啡酰基奎宁酸:0.95%以下、1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸:0.55%以下、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸:0.33%以下、飞蓬酯乙乙酯:0.42%以下。
2.根据权利要求1所述的灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法,其特征在于,在步骤2)中,所述分离工艺通过包括以下步骤的方法进行:
将步骤1)中制得的供试品用大孔吸附树脂进行柱层析,优选地,所述大孔树脂为DM-130,先用水洗脱,弃去洗脱液,再用乙醇溶液洗脱,收集乙醇溶液洗脱液,再用乙酸乙酯萃取,分别得到下层的乙醇提取液即A组分和上层的乙酸乙酯萃取液即B组分。
3.根据权利要求1或2所述的灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法,其特征在于,在步骤3)中,通过包括以下步骤的方法进行:
将步骤2)中得到的A组分用盐酸调节pH至有沉淀析出,将沉淀滤出,并用四氢呋喃-甲醇溶液溶解后,再通过高压液相色谱仪进行分离,其中以乙醇-水为流动相,梯度洗脱,得到1、2号化合物;及
将步骤2)中得到的B组分减压蒸干后的固体物,用丙酮溶解后,再通过高压液相色谱仪进行分离,其中以石油醚-丙酮为流动相,梯度洗脱,得到3、4、5、6号化合物。
4.根据权利要求1至3任一项所述的提取分离方法,其特征在于,在步骤1)中,所述乙醇溶液的浓度为50体积%。
5.根据权利要求1至4任一项所述的提取分离方法,其特征在于,在步骤2)中,所述乙醇溶液的浓度为50体积%。
6.根据权利要求1至5任一项所述的提取分离方法,其特征在于,在步骤3)中,调节pH值至4;优选地,所述四氢呋喃-甲醇溶液中四氢呋喃和甲醇的体积比为1:1。
7.根据权利要求1至6任一项所述的提取分离方法,其特征在于,在步骤3)中,以乙醇-水为流动相,梯度洗脱的条件如下:
0~30分钟内,乙醇-水流动相中乙醇的浓度为50体积%,水的浓度为50体积%;于另外的10分钟内,乙醇的浓度匀速变为70体积%,水的浓度匀速变为30体积%,得到1号化合物;再于另外的20分钟内,乙醇的浓度匀速变为95体积%,水的浓度匀速变为5体积%,得到2号化合物。
8.根据权利要求1至7任一项所述的提取分离方法,其特征在于,在步骤3)中,以石油醚-丙酮为流动相,梯度洗脱的条件如下:
0~25分钟内,石油醚-丙酮流动相中石油醚的浓度为80体积%,丙酮的浓度为20体积%;于另外的5分钟内,石油醚的浓度匀速变为60体积%,丙酮的浓度匀速变为40体积%,得到3号化合物;再于另外的20分钟内,石油醚的浓度匀速变为50体积%,丙酮的浓度匀速变为50体积%;还于另外的5分钟内,石油醚的浓度匀速变为40体积%,丙酮的浓度匀速变为60体积%,得到4号化合物;再于另外的5分钟内,石油醚的浓度匀速变为30体积%,丙酮的浓度匀速变为70体积%,得到5号化合物;及于另外的5分钟内,石油醚的浓度匀速变为20体积%,丙酮的浓度匀速变为80体积%,得到6号化合物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的提取分离方法得到的灯盏细辛酚有关物质,所述灯盏细辛酚有关物质包括在灯盏细辛酚中质量百分比含量分别如下的六个化合物:灯盏甲素为1.51%以下、芹菜素为1.30%以下、3,4-二咖啡酰基奎宁酸为0.95%以下、1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸为0.55%以下、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸为0.33%以下、飞蓬酯乙乙酯为0.42%。
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