[发明专利]灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物中所含物质的提取分离方法，尤其涉及一种灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法，属于医药技术领域。 

背景技术

灯盏细辛是菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草，又名灯盏花、东菊，主要分布于我国西南地区，尤以云南较多。首载于《滇南本草》，《中国药典》1977年版一部曾予收载。灯盏细辛性寒、微苦、甘温辛，具有微寒解毒、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛的功效。灯盏细辛在临床上除主要用于心脑血管系统疾病外，在糖尿病、肾病、颈性眩晕、老年性疾病的治疗上也有较好的疗效。基于其确切的药理作用及广泛的临床应用，因此灯盏细辛具有良好的开发前景。 

灯盏细辛酚是以灯盏细辛为基础研究开发的一种中成药，经过大量的药理实验及临床实验证明其在脑血管疾病方面具有确切的疗效。作为药品，除了应具有确切的疗效外，其安全性也是不容忽视的一个方面。把其中所含的成分弄清楚是保证其安全性的首要前提。我们建立了灯盏细辛酚标准指纹图谱（参见专利“灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、建立方法及应用”，申请号：201110315301.X），对其中的物质进行了详细的分析和指认。 

本发明在已建立的指纹图谱基础上，对其中除五个主要成分（灯盏乙素、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、1,5-二咖啡酰基奎宁酸、飞蓬酯乙、4,5-二咖啡酰基奎宁酸）以外的六个化合物进行提取分离、结构鉴定及控制方法研究，进一步明确了灯盏细辛酚中所含物质及其基本性质，以及其在灯盏细辛酚中的控制方法，为灯盏细辛酚的安全性评价及质量控制体系做了进一步的补充和完善。 

发明内容

因此，本发明的目的是为了进一步明确灯盏细辛酚有关物质及其基本性质，提供一种灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法，从而能够最大限度地弄清灯盏细辛酚中所含成分，并更好地对灯盏细辛酚的质量进行评价和控制。 

除非特别指明，本文中的“灯盏细辛酚有关物质”是指：3,4-二咖啡酰基奎宁酸、灯盏甲素、1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸、芹菜素和飞蓬酯乙乙酯。 

针对上述目的，本发明的技术方案如下： 

本发明提供一种灯盏细辛酚有关物质的提取分离方法，所述方法包括以下步骤： 

1）提取工艺：取灯盏细辛酚，加乙醇溶液溶解，制成供试品； 

2）分离工艺：将步骤1）中制得的供试品进行柱层析，先用水洗脱，再用乙醇溶液洗脱，然后再用乙酸乙酯萃取，分别得到下层的乙醇提取液即A组分和上层的乙酸乙酯萃取液即B组分； 

3）再将步骤2）制得的A组分和B组分分别通过高压液相色谱仪分离，其中A组分得到1、2号化合物，B组分得到3、4、5、6号化合物； 

4）利用核磁共振氢谱和碳谱鉴定1-6号化合物，所述1号化合物为灯盏甲素；所述2号化合物为芹菜素；所述3号化合物为3,4-二咖啡酰基奎宁酸；所述4号化合物为1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸；所述5号化合物为3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸；所述6号化合物为飞蓬酯乙乙酯； 

5）根据已建立的灯盏细辛酚的指纹图谱，计算步骤4）鉴定的所述六个化合物的峰分别占总峰面积的百分比，从而分别得出所述六个化合物在灯盏细辛酚中的质量百分比含量的步骤，其中灯盏甲素为1.51%、芹菜素为1.30%、3,4-二咖啡酰基奎宁酸为0.95%、1,3,5-三咖啡酰基奎宁酸为0.55%、3,4,5-三咖啡酰基奎宁酸为0.33%和飞蓬酯乙乙酯为0.42%。 

优选地，在步骤2）中，所述分离工艺通过包括以下步骤的方法进行： 

将步骤1）中制得的供试品用大孔吸附树脂进行柱层析，先用水洗脱，弃去洗脱液，再用乙醇溶液洗脱；收集乙醇溶液洗脱液后，用乙酸乙酯萃取，分别得到下层的乙醇提取液即A组分和上层的乙酸乙酯萃取液即B组分； 

优选地，在步骤3）中，通过包括以下步骤的方法进行： 

将步骤2）中得到的A组分用盐酸调节pH值至有沉淀析出，将沉淀 滤出，并用四氢呋喃-甲醇溶液溶解后，再通过高压液相色谱仪进行分离，其中以乙醇-水为流动相，梯度洗脱，得到1、2号化合物；及 

将步骤2）中得到的B组分减压蒸干后的固体物，用丙酮溶解后，再通过高压液相色谱仪进行分离，其中以石油醚-丙酮为流动相，梯度洗脱，得到3、4、5、6号化合物。 

优选地，所述步骤1）所述乙醇溶液的浓度为50体积%。 

优选地，在步骤2）中，所述大孔树脂为DM-130。