[发明专利]重组链霉亲和素的制备工艺

权利要求书

1.一种重组链霉亲和素的制备工艺，具体步骤如下：

1)人工合成表达重组链霉亲和素的重组基因，所述重组基因的序列包括核心链霉亲和素基因序列以及位于核心链霉亲和素基因序列左右两侧的限制性酶切位点序列；

2)重组质粒的构建：将步骤1）的重组基因插入载体，获得能够表达重组链霉亲和素的重组质粒；

3)基因工程菌的制备：将步骤2）获得的重组质粒转化宿主细胞制备基因工程菌；

4)外源基因的表达：基因工程菌发酵表达重组链霉亲和素；

5)目的蛋白的分离纯化：裂解菌体，通过蛋白纯化步骤获得重组链霉亲和素。

2.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述核心链霉亲和素基因序列如SEQ IDNO:3所示。

3.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述位于核心链霉亲和素基因序列左右两侧的限制性酶切位点分别为Nde I酶和Hind III酶的限制酶切位点。

4.如权利要求3所述的制备工艺，其特征在于，所述人工合成的表达重组链霉亲和素的重组基因序列如SEQ ID NO:1所示。

5.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述载体为含有T7强启动子的原核表达载体。

6.如权利要求1或5任一权利要求所述的制备工艺，其特征在于，所述载体为pET21a(+)。

7.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌。

8.如权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述蛋白纯化步骤采用五步纯化法，该五步纯化法依次为包涵体溶解、阳离子交换层析、包涵体蛋白复性、阴离子交换层析以及凝胶过滤层析。

9.如权利要求8所述的制备工艺，其特征在于，所述五步纯化法具体步骤为：

A.包涵体溶解：尿素溶液变性包涵体蛋白；

B.阳离子交换层析：SP Sepharose F.F.层析柱初步分离步骤A变性后的包涵体蛋白；

C.包涵体蛋白复性：将上一步初步分离的变性后的包涵体蛋白，采用稀释复性的方法复性，获得复性蛋白溶液；

D.阴离子交换层析：用Q Sepharose F.F层析柱纯化步骤C所得的复性蛋白溶液，获得重组链霉亲和素；

E.凝胶过滤层析：Superdex 75凝胶过滤层析进一步纯化步骤D获得的重组链霉亲和素，收集进一步纯化的目的蛋白。