[发明专利]单纯疱疹病毒Ⅱ型基因重组减毒活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种单纯疱疹病毒II型基因重组减毒活疫苗，其特征在于敲除了其基因组中的US2、US3、US4和US5基因。

2.一种如权利要求1所述的单纯疱疹病毒II型基因重组减毒活疫苗，其特征在于联合敲除了其基因组中的US2、US3、US4、到US5基因和其它复制或感染非必需基因片段；

所述其它复制或感染非必需基因片段是US9、US10、US11和US12基因，UL55与UL56到左侧RL2与RL1基因，UL43、UL44、UL45、UL46到UL47基因，或者上述三者的任意组合。

3.一种如权利要求1或2所述的单纯疱疹病毒II型基因重组减毒活疫苗的制备方法，其特征在于：

步骤一：取疱疹患者的水泡液，分离鉴定出野生单纯疱疹病毒II型；

步骤二：扩大培养后提取病毒完整基因组设计引物扩增出单纯疱疹病毒II型病毒基因组的US2基因左侧700bp至2000bp的同源侧翼序列和单纯疱疹病毒II型病毒基因组的US5基因右侧700bp至2000bp的同源侧翼序列；

步骤三：将步骤二所述同源侧翼序列和荧光蛋白基因克隆至pShuttle-CMV载体，使荧光蛋白基因位于同源侧翼序列之间，再和单纯疱疹病毒II型基因组共转染至Vero细胞中，进行同源重组；

步骤四：在荧光显微镜下使用一种或者联合使用多种荧光蛋白基因作为标记挑选出重组病毒；经过空斑纯化后可获得单纯疱疹病毒II型基因重组减毒活疫苗。