[发明专利]双组分系统基因dtrA和dtrB的用途与利用方法

权利要求书

1.一种双组分系统基因dtrA和dtrB的用途，其特征在于：用于提高菌株热敏感性和UV辐射抗性。

2.如权利要求1所述的双组分系统基因dtrA和dtrB的用途，其特征在于：双组分系统基因dtrA和dtrB的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

3.一种利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，包括克隆双组分系统基因dtrA和dtrB的步骤，双组分系统基因的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，其特征在于：还包括构建具有热敏感性和UV辐射抗性的ΔdtrA和ΔdtrB突变株的步骤。

4.根据权利要求3所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：克隆双组分系统基因dtrA和dtrB的步骤包括设计dtrA和dtrB基因的PCR扩增特异性引物。

5.根据权利要求4所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：克隆双组分系统基因dtrA和dtrB的步骤包括从Deinococcus radiodurans基因组DNA中扩增出完整的dtrA和dtrB核苷酸序列。

6.如权利要求5所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：构建具有热敏感性和UV辐射抗性的ΔdtrA和ΔdtrB突变株的步骤包括：

1）．用SacII酶和EcoRV酶将分别连接在载体上的dtrA基因和dtrB基因从中间切开；

2）．插入两端加了同一酶切位点的卡那抗性盒，测序验证克隆基因；

3）．通过PCR将插入卡那抗性盒的目的片段扩增出来；

4）．将插入卡那抗性盒的DNA片段通过同源重组的方法直接转化到耐辐射异常球菌R1中。

7.如权利要求6所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：所述连接dtrA和dtrB基因的载体为T载体。

8.如权利要求7所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：所述连接dtrA基因的载体为pMD19T载体。

9.如权利要求8所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：所述连接dtrB基因的载体为pGEM-T Easy载体。

10.如权利要求6至9中任一项所述的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法，其特征在于：具体将DNA片段转化到耐辐射异常球菌R1中的转化方法如下：

1）挑取耐辐射异常球菌R1单菌落于TGY液体培养基中，30℃培养至对数期；

2）按1:100转接至新鲜的TGY液体培养基中，30℃培养至对数期（OD600≈0.4）；

3）取2mL菌液6000×g离心2min，去上清，用200μL含30mM CaCl₂的TGY液体培养基重悬菌体，30℃水浴80min；

4）吸50μL上述菌悬液于一新的EP管中，加入10μL冰上放置的DNA片段，振荡混匀后，30℃水浴90min；

5）加800μL新鲜TGY液体培养基混匀，于30℃摇床中培养4h；

6）取100μL培养好的菌液涂布于不含抗生素的TGY固体培养基上，30℃培养约2d；

7）挑取单菌落，提取其基因组，用验证引物进行PCR验证，获得ΔdtrA和ΔdtrB突变株。

11.通过权利要求10的利用双组分系统基因dtrA和dtrB提高菌株热敏感性和UV辐射抗性的方法构建的突变菌株。