[发明专利]一粒小麦成熟胚的组织培养方法

权利要求书

1.一粒小麦成熟胚的组织培养方法，包括种子消毒、剥离种胚、愈伤组织诱导培养、分化培养及生根培养的步骤，其特征在于，

所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I为：在基础培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)和/或6-糖氨基嘌呤(KT)后制成的pH值为5.8-6.0的培养基；所述分化培养步骤中使用的培养基II为：在基础培养基中添加α-萘乙酸(NAA)、6-(4羟基-3-甲基-2-反丁烯基)氨基嘌呤(ZT)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、6-糖氨基嘌呤(KT)或2-羟乙基-三甲基氢氧化胆碱(CC)中的一种或多种后制成的pH值为5.8-6.0的培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基础培养基的配方为：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I中2，4-D与KT的添加比例为：2，4-D0.5-1mg/L+KT 0-0.05mg/L、2，4-D 1-2mg/L+KT 0-0.05mg/L、2，4-D3-4mg/L+KT 0-0.05mg/L、2，4-D 5-6mg/L+KT 0-0.05mg/L、2，4-D0.5-1mg/L+KT 0.1-0.15mg/L、2，4-D 1-2mg/L+KT 0.1-0.15mg/L、2，4-D 3-4mg/L+KT 0.1-0.15mg/L、2，4-D 5-6mg/L+KT 0.1-0.15mg/L、2，4-D 0.5-1mg/L+KT 0.5-0.6mg/L、2，4-D 1-2mg/L+KT 0.5-0.6mg/L、2，4-D 3-4mg/L+KT 0.5-0.6mg/L或2，4-D 5-6mg/L+KT 0.5-0.6mg/L。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述分化培养步骤中使用的培养基II中NAA、ZT、6-BA、KT与CC的添加比例为：KT 0.5-1.0mg/L、KT 1.0-2.0mg/L、KT 2.0-3.0mg/L、NAA0.5-1.0mg/L+KT 1.0-2.0mg/L、NAA 0.5-1.0mg/L+ZT 1.0-2.0mg/L、NAA0.5-1.0mg/L+6-BA 1.0-2.0mg/L、NAA 0.5-1.0mg/L+6-BA1.0-2.0mg/L+KT 1.0-2.0mg/L、NAA 0.5-1.0mg/L+6-BA1.0-2.0mg/L+KT 1.0-2.0mg/L+ZT 1.0-2.0mg/L或NAA0.5-1.0mg/L+6-BA 1.0-2.0mg/L+KT 1.0-2.0mg/L+ZT 1.0-2.0mg/L+CC1.0-2.0mg/L。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I为基础培养基+2，4-D 1-2mg/L+KT0-0.05mg/L。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分化培养步骤中使用的培养基II为基础培养液+NAA 0.5-1.0mg/L+ZT 1.0-2.0mg/L。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，种子消毒的方法为：将一粒小麦成熟种子于水中浸泡16-18小时后，置于75-80%的酒精中处理0.5-1.5分钟，然后浸泡于0.1-0.15%的升汞中13-15分钟，最后用无菌水冲洗3-5次。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，愈伤组织诱导培养的方法为：将剥离得到的成熟胚，盾片朝上接种于培养基I上，置于24-25°C暗培养，得到成熟胚愈伤组织。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，分化培养的方法为：将成熟胚愈伤组织转移至培养基II中，置于25°C，光照16小时/天，光照强度为2000-3000lux，培养至出苗。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，生根培养的方法为：将经过分化培养后长出的苗转移至生根培养基中进行培养，待长至苗高达6-9cm时，炼苗3-5天，最后将植株移入大田中或进行温室培养；其中，所述生根培养基的配方为：