[发明专利]一种线粒体呼吸链复合物I酶活性检测方法和试剂

权利要求书

1.一种线粒体呼吸链复合物I（NADH-Q还原酶）活性测定方法，其特征在于它的原理如下：

NADH-Q还原酶在特定条件下能够将NADH中的电子转移给氧化型电子受体R生成还原型的R；还原型的R在特定的激发波长下可以发射出特异波长的荧光，因此在特定的条件下可检测到还原型R的荧光值，由于NADH-Q还原酶催化底物反应的速率与还原型R的生产量成正比，因此检测还原型R的荧光值的变化，就可以计算出NADH-Q还原酶的酶活力。

2. 如权利要求书1所述的电子受体R，其特征在于：它是一种在物理和化学领域普遍被接受的任何能在氧化还原反应中被还原的分子或试剂，氧化型R被NADH-Q还原酶还原后产生还原型R，还原型R可以在特定激发光条件下发射出特异的荧光。

3. 如权利要求书1所述的电子受体R，其特征在于，它是刃天青（Resazurin），它的结构式为：

刃天青被还原后的产物是试卤灵（Resorufin），试卤灵在530-580nm激发波长下，可以发射波长为560-620nm的荧光。

4. 一种NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：它是根据权利要求书1所述的原理和方法来开发配制的，它主要用于NADH-Q还原酶的酶活性的分析和检测。

5. 如权利要求书4所述的NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：其主要成分包括如权利要求书2或3所述的电子受体R，这种检测试剂主要用于NADH-Q还原酶的酶活性的分析和检测。

6. 如权利要求书4-5所述的NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：其主要成分还可以包括电子供体NADH，这种检测试剂主要用于NADH-Q还原酶的酶活性的分析和检测。

7. 如权利要求书4-6所述的NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：其成分中还可以包括抑制剂，这种抑制剂是在酶学上普遍被接受的各种能够抑制NADH-Q还原酶酶活力的试剂或分子。

8. 如权利要求书4-6所述的NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于其成分还可以包括缓冲液和稳定剂，所述的稳定剂是被物理、化学和酶学上普遍接受和使用的各种表面活性剂；所述的缓冲液中的缓冲试剂是被物理、化学和酶学上普遍接受的能将体系的pH值缓冲或稳定5.0—9.0的范围中的试剂。

9. 一种NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：它是基于权利要求书1-8所述的原理、方法和试剂的基础上开发配制的，其主要成分包括：

   如权利要求书8所述的缓冲液                   10—1000mmol/L

   pH范围                                             5.0—9.0

   如权利要求书8所述的稳定剂                      0.01%—10%

   NADH                                        0.01—10mmol/L

   如权利要求书7所述的抑制剂                      0—20mmol/L

   如权利要求书1-3所述的电子受体R              0.002—10mmol/L

这种检测试剂主要用于NADH-Q还原酶的酶活性分析和检测。

10. 根据权利要求9所述NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、NADH、抑制剂、R组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、NADH、R组成；试剂2，由抑制剂组成。

11. 根据权利要求9所述NADH-Q还原酶活性检测试剂，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、NADH、抑制剂、R组成组成三剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、NADH组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、R组成；试剂3，由抑制剂组成。

12. 如权利要求书1-11所述的NADH-Q还原酶活性测定的方法和酶活性检测的试剂，其特征在于，这种检测方法和试剂可以用于分析和检测各种待测样本中的NADH-Q还原酶的酶活力。

13. 如权利要求书1-11所述的NADH-Q还原酶活性测定的方法和酶活性检测的试剂，其特征在于，这种检测方法和试剂可以用于分析和检测人体的各种体液、组织和细胞样本中的NADH-Q还原酶的酶活力。

14. 如权利要求书1-11所述的NADH-Q还原酶活性测定的方法和酶活性检测的试剂，其特征在于，这种检测方法和试剂可以用于分析和检测完整细胞、已破碎细胞、完整线粒体和已破碎线粒体中的NADH-Q还原酶的酶活力。

15. 如权利要求书1-11所述的NADH-Q还原酶活性测定的方法和酶活性检测的试剂，其特征在于，这种检测方法和试剂可以用于分析、检测和诊断与NADH-Q还原酶的酶活力异常导致的各种疾病，特别是由NADH-Q还原酶的酶活力异常导致的各种遗传和代谢疾病。