[发明专利]一种乙酰胆碱酯酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种乙酰胆碱酯酶突变体，其特征在于，所述的乙酰胆碱酯酶突变体的氨基酸序列对应于SEQ ID NO:2氨基酸序列的第408位由Tyr突变为Phe。

2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸选自下组：

(i)编码权利要求1所述的乙酰胆碱酯酶突变体的多核苷酸；或

(ii)与(i)中的多核苷酸互补的多核苷酸。

3.一种基因构建物，其特征在于，所述基因构建物从5’到3’依次包括以下操作性相连的元件：

(a)葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列；

(b)乙酰胆碱酯酶突变体片段的编码序列，其编码氨基酸序列如SEQ IDNO:2中第40-622位且其中第408位由Tyr突变为Phe的乙酰胆碱酯酶突变体片段；和

(c)酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列。

4.如权利要求3所述的基因构建物，其特征在于，

所述的葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列是SEQ ID NO:3所示序列中第1-75位的序列；或

所述的乙酰胆碱酯酶突变体片段的编码序列是SEQ ID NO:3所示序列中第76-1824位的序列；或

所述的酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列是SEQ ID NO:3所示序列中第1858-2817位的序列。

5.一种重组的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3-5任一所述的基因构建物。

6.一种细胞，其特征在于，所述的细胞是酵母细胞，所述细胞中含有权利要求6所述的表达载体；或其基因组中整合有权利要求3-5任一所述的基因构建物。

7.一种在细胞表面展示表达外源蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

(i)将权利要求3-5任一所述的基因构建物导入到酵母细胞中，获得重组细胞；

(ii)培养(i)的重组细胞，从而在细胞表面展示表达外源蛋白。

8.一种检测待测样品中有机磷或氨基甲酸酯类农药的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：

权利要求6所述的细胞；或

固相载体，以及吸附或包埋在固相载体中的权利要求6所述的细胞。

9.一种检测待测样品中有机磷或氨基甲酸酯类农药的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将权利要求6所述的细胞固定于固相载体或悬浮于与所述细胞相容性的介质中，形成检测体系；

(2)在(1)的检测体系中加入待测样品，混合；和

(3)检测(2)的体系中乙酰胆碱酯酶突变体的活性，从而确定待测样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药或其含量。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，包括：向步骤(2)的检测体系中加入乙酰胆碱酯酶的底物，通过检测乙酰胆碱酯酶突变体对底物的水解情况确定待测样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药或其含量。