[发明专利]制备头霉素C的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药工程领域，具体涉及一种制备高纯度头霉素C(Cephamycin C)的方法。

背景技术

头霉素C最早由美国的Lilly研究室于1971年发现的。由于其头孢烯母核C₇位上反式甲氧基的存在，可以阻止内酰胺环与酶分子的接近，提高β-内酰胺酶的稳定性。它不仅为头孢菌素类抗生素提供了更广泛的来源，也为头孢菌素的化学改造开创了一种新的类型-7α-甲氧基头孢菌素，也就是头霉素类抗生素。

头霉素C(Cephamycin C)的化学结构

目前头霉素类抗生素已发展到第三代，第二、三代头霉素类的合成，都是从第一代头霉素C开始合成的。随着第二、三代头霉素类抗生素的广泛应用，头霉素C作为原料药越来越受到重视。

已报道的头霉素C的制备方法工艺复杂、收率较低、纯度不是很高，且最终获得的头霉素C有少量的色素存在。美国专利US 4332891报道了头霉素C的提取纯化工艺，采用两种树脂吸附的方法，先经阴离子树脂吸附，经蒸馏水洗涤后，以NaCl溶液洗脱头霉素C，再用大孔吸附树脂吸附，以蒸馏水洗脱。这种方法的缺点是收率低、纯度不高，同时在终产物溶液中有少量色素存在。CN 101134759B报道了一种头霉素C的分离纯化工艺，其先用大孔吸附树脂吸附，再用蒸馏水洗涤吸附树脂，然后用含醇的水溶液洗脱头霉素C，即得到头霉素C的溶液。该方法工艺简单，收率较高，但得到的产物纯度较低。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的不足，本申请人发明了一种制备高纯度头霉素C的方法，该方法不仅工艺简单，能够很好的去除色素类杂质，且获得头霉素C的收率和纯度都很高。

因此，本发明提供一种制备头霉素C的方法，所述方法包括通过发酵液前处理、吸附树脂处理和反相硅胶柱层析处理，从头霉素C的发酵液中制备头霉素C的步骤。

具体地，所述方法包括以下步骤：

a)发酵液离心取上清，用酸将pH值调为3.0-6.0，减压真空旋蒸浓缩至发酵液体积的50％左右，加入浓缩液体积2-4倍的低脂肪醇沉淀去除蛋白类杂质，再减压真空旋蒸去除部分低脂肪醇，即获得澄清的上柱母液；

b)将获得的上柱母液调pH值至2.0-6.0，并缓慢通过大孔吸附树脂层析柱，除去色素和部分杂质，收集上柱流出液；

c)用pH值为3.0-5.0的酸水预处理十八烷基(C18)或八烷基(C8)键合硅胶层析柱，并将b)中收集的上柱流出液的pH值调为2.5-5.5，缓慢通过上述C18或C8反相硅胶柱；然后用pH值为3.0-5.0的酸水洗涤柱子5-8CV，再用3-5CV的纯水洗涤柱子；然后加入含4％-10％(v∶v)低脂肪醇的水溶液，5-10CV洗脱柱子，分步收集并HPLC检测流出液；并将纯度大于预定值(优选大于88.0％)的部分合并，减压真空旋蒸浓缩后冻干，制得头霉素C无定型粉末。

根据本发明一个优选的实施方式，a)步骤中所用的酸为盐酸或者硫酸，优选为盐酸。

根据本发明一个优选的实施方式，a)步骤中发酵液离心取上清后，优选pH值调为3.5-4.5。

根据本发明一个优选的实施方式，a)步骤中低脂肪醇为甲醇、乙醇、丙酮或异丙醇，优选为甲醇或乙醇。

根据本发明一个优选的实施方式，a)步骤中沉淀去除杂质所用低脂肪醇的体积为浓缩液体积的2-4倍，优选为3倍。

根据本发明一个优选的实施方式，b)步骤中上大孔吸附树脂的上柱母液的pH值优选4.5-5.5。

根据本发明一个优选的实施方式，b)步骤中大孔吸附树脂为市售常用聚苯乙烯-二乙烯苯型大网格中等极性树脂，其比表面积≥300m²/g，特征孔径为调和粒径250-840μm。优选罗门哈斯公司XAD-4、XAD-2或者XAD-18型树脂，最优选为XAD-4树脂。

根据本发明一个优选的实施方式，c)步骤中的酸水指含有少量酸的水溶液，所述酸为硫酸或盐酸，优选为盐酸。

根据本发明一个优选的实施方式，c)步骤中酸水的pH值优选3.0-4.0。

根据本发明一个优选的实施方式，c)步骤中八烷基(C8)或十八烷基(C18)键合硅胶填料为球形亲水型或非亲水型，优选亲水型，其中C8型特征孔径为调和粒径为10-60μm；C18型特征孔径为调和粒径为50-70μm。优选苏州赛分科技有限公司填料GP-C18，GP-C8，HP-C18；上海大有色谱技术服务有限公司填料DYB71306和DYB71326。