[发明专利]一种人角膜基质细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201210163244.2 | 申请日： | 2012-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN102703375A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 樊廷俊;徐晓辉;赵君;苗莹;王宝泉;杜玉堂 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学;青岛中皓生物工程限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 张中南;曾庆国 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 角膜 基质 细胞系 构建 方法 | ||
1.一种人角膜基质细胞系的构建方法，其特征在于所述的构建方法是先将角膜取出后用庆大霉素消毒，再撕除带有后弹力层的角膜内皮和带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的角膜基质组织块后进行消化处理，将角膜基质组织块按近后弹力层面向下平贴于培养孔的底部，然后先加入无血清培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，后将培养液更换为人角膜基质细胞专用培养液，细胞长成单层后用胰酶消化法进行继代培养，培养至第60代完成了人角膜基质细胞系的构建；其中，人角膜基质细胞专用培养液为含有20%胎牛血清、0.4‰~1.0‰羧甲基壳寡糖和0.01‰~0.02‰人碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养液。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的培养液中还添加有0.1‰~0.2‰的I型胶原蛋白和0.05‰~0.1‰的II型胶原蛋白。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的培养液中还添加有0.01‰~0.02‰的人基质细胞衍生因子1。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的贴壁培养是先将贴有人角膜基质组织块的培养孔中加入0.1~0.3毫升的无血清DMEM/F12培养液，在二氧化碳培养箱中37℃下进行贴板培养12-16小时后，再将每个培养孔中的无血清培养液更换为1毫升人角膜基质细胞专用培养液。
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