[发明专利]一种竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱、制备及其应用

说明书

技术领域

本发明属于药物分离技术领域，具体地说，是涉及竹叶提取液中黄酮类物质的高选择性分离、纯化和富集的竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱的制备方法。

背景技术

在药物分离中，样品的前处理过程至关重要。柱色谱分离是一种较为常用的样品前处理技术。固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来，与液-液萃取法(Liquid-Liquid Extraction，LLE)相比，SPE具有回收率高、分离效果好，操作简单、省时、省力等优点而被广泛应用于样品的前处理。

目前SPE柱填料种类正相、反相及离子交换柱和吸附树脂柱。正相SPE柱填料主要为硅胶、氧化铝和硅镁吸附剂等。反相SPE柱填料主要为C₁₈键合硅胶、氰基键合硅胶柱(CN)等。这些柱填料通过吸附目标物，使产生干扰的共提物被淋洗移除，达到净化、富集的目的；或将杂质留在柱上，待测的目标物通过SPE柱，样品被净化，但不能富集待测组分，也不能分离保留性质比待测组分更弱的杂质，造成净化不完全。

分子印迹固相萃取(Molecularly imprinted solid-phase extraction,MIPSE)是利用MIP选择吸附机理制备SPE填料，不仅可以提高SPE净化效果，实现低浓度的药物的分离富集，同时可以实现SPE柱的多次重复使用，从而降低成本。

竹叶黄酮是从竹叶中提取出的一类天然产物，具有抗氧化、抗衰老等作用，是新兴的功能性食品添加剂和天然药物。竹叶黄酮以炭苷黄酮为主，荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异特荆苷是竹叶黄酮的主要成分。目前市场上的竹叶黄酮产品主要为粗制品，上述4种黄酮的总含量一般在10%以内，难以满足市场对高含量竹叶黄酮产品的需求。

发明内容

本发明的目的在于针对现有实验室分离、富集竹叶黄酮方法的缺点和不足，提供一种竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱、制备及应用方法，使其能够快速简单的分离纯化竹叶提取液中的竹叶黄酮，可直接应用于竹叶黄酮的特异性选择分离、高效富集。

本发明是通过以下技术方案实现的：

竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱的制备方法，包括以下步骤：

⑴制备质量浓度为3%-3.5%的分散剂水溶液；将功能单体4-乙烯基吡啶和模板分子木犀草素溶解在分散剂水溶液中；将交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯、引发剂偶氮二异丁腈分别溶解于有机溶剂中，然后和上述分散剂水溶液混合；并进行超声脱气；在70-75℃下搅拌，在通氮气保护下进行聚合反应10-24h，生成分子印迹聚合物颗粒；

所述的模板分子木犀草素、4-乙烯基吡啶、二甲基丙烯酸乙二醇酯的摩尔比为1∶（5-6）∶80，二甲基丙烯酸乙二醇酯、有机溶剂、分散剂溶液的体积比为1∶2-3∶20－30。偶氮二异丁腈是本领域常规技术，只要加入少量引发即可。

⑵反应结束后，离心过滤，分离出聚合物颗粒；再将分离出的聚合物颗粒用水反复洗涤，再用甲醇、丙酮洗涤多次；最后通过索氏提取进一步除去聚合物颗粒中的模板分子木犀草素，直至检测不出模板分子，然后真空干燥；

⑶将⑵所制得的聚合物颗粒填充于聚丙烯或玻璃色谱柱管内，管的两端分别装上筛板，即制得固相萃取柱。

所述的分散剂水溶液为羧乙基纤维素水溶液；

所述的筛板为聚乙烯筛板，其孔径为20μm。

所述的超声脱气时间为10-20min；所述的搅拌转速为600-700rpm。

所述的水为超纯水。

所述聚合物颗粒真空干燥，温度为60℃，干燥时间为6~8h。

本发明制备的竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱，应用于竹叶提取液中竹叶黄酮的分离、纯化和富集，具体步骤如下：

⑴装填竹叶黄酮分子印迹固相萃取柱后，先用乙腈活化，再用质量浓度5-15%甲醇水溶液淋洗，

⑵加入样品提取液或样品溶液;

⑶用15-15%甲醇水溶液淋洗；

⑷用甲醇洗脱2次，收集洗脱液，用0.45μm滤膜过滤后，进行收集。

上述优选甲醇水溶液浓度10%；本发明制备的竹叶黄酮分子印迹聚合物颗粒是一种具有固定空穴大小、形状和确定排列功能基团的高分子交联聚合物，对竹叶黄酮的立体结构具有动态记忆功能。本发明可应用于竹叶提取液中竹叶黄酮的分离、富集和纯化，较普通的液-液萃取法、C₁₈固相萃取法更为简单、快速、更为高效。

具体实施方式

以下结合实施例进一步阐明本发明内容，但本发明并不限制于如下实施例的范围。