[发明专利]人源dcf1基因转基因果蝇模型的构建方法有效
| 申请号： | 201210164601.7 | 申请日： | 2012-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN102766635A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 文铁桥;蒋萌 | 申请（专利权）人： | 上海大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;A01K67/033 |
| 代理公司： | 上海上大专利事务所(普通合伙) 31205 | 代理人： | 陆聪明 |
| 地址： | 200444*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人源 dcf1 基因 转基因 果蝇 模型 构建 方法 | ||
1.一种人源dcf1基因转基因果蝇模型的构建方法，其特征在于该方法的具体步骤为：a.将人源dcf1基因开放式阅读框对应的cDNA序列构建入果蝇转基因载体pWIZ中，得到果蝇转基因载体pUAST-dcf1；
b.将步骤a所得果蝇转基因载体pUAST-dcf1为材料，利用显微注射的基因工程技术手段构建并得到人源dcf1转基因果蝇。
2.根据权利要求1所述的人源dcf1基因转基因果蝇模型的构建方法，其特征在于所述的步骤a的具体方法为：
a-1.以人子宫颈癌细胞HeLa细胞的cDNA为模版进行PCR扩增，引物为：
dcf1 primers： 5’-CGGAATTCATGGCGGCGCCGAAGGGG AG-3’
5’-GCTCTAGATTAAATTTCAGAATGAGCAA-3’)，
得到大小为972bp的dcf1基因开放式阅读框全长的目的片段；再用EcoRI和XbaI双酶切，收集片段；
a-2.用EcoRI和XbaI双酶切空载体质粒pWIZ，收集大片段备用；
a-3.将步骤a-1和步骤a-2所得的两个片段连接起来，得到果蝇转基因载体pUAST-dcf1。
3.根据权利要求1人源dcf1基因转基因果蝇模型的构建方法，其特征在于所述的步骤b的具体步骤为：
b-1.将转基因载体pUAST-dcf1（终浓度0.8 μg/mg）和辅助质粒pΔ2-3（终浓度0.2 μg/mg）混合后，将此混合液注入果蝇的受精卵的尾部，并放置在16℃的湿盒中培养；
b-2.待步骤b-1所得的受精卵孵化成幼虫然后羽化为成虫后即和野生型w1118交配，挑取子代眼色为红色的果蝇即为转基因果蝇；
b-3.将步骤b-2所得转基因果蝇和Double Balance果蝇以及野生型w1118杂交，筛选出基因型为w;UAS-dcf1/UAS-dcf1;+/+的果蝇。
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