[发明专利]重组转录激活子样效应因子、转录激活子样效应因子核酸酶及其编码基因及应用

权利要求书

1.一对多肽，其特征在于，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

2.一对编码权利要求1所述多肽的基因，其特征在于，分别为编码为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所述氨基酸序列的核苷酸序列。

3.权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

4.一对重组转录激活子样效应因子，其特征在于，分别含有权利要求1所示SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

5.权利要求4所述一对重组转录激活子样效应因子，其特征在于，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽分别嵌入在转录激活子样效应因子氨基酸序列的框架内，多肽的两端分别连接转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端；

所述转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端为天然的或经过人工改造的序列。

6.权利要求4或5所述一对重组转录激活子样效应因子，其特征在于，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

7.一对重组转录激活子样效应因子的编码基因，其特征在于，为编码权利要求5或6所述重组转录激活子样效应因子氨基酸序列的核苷酸序列。

8.权利要求7所述一对重组转录激活子样效应因子的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。

9.一对转录激活子样效应因子核苷酸酶，其特征在于，是由权利要求4～6任一项所述的一对重组转录激活子样效应因子分别与DNA切割蛋白融合形成的融合蛋白。

10.权利要求9所述一对转录激活子样效应因子核苷酸酶，所述DNA切割蛋白为天然或经人工改造的Fok1DNA内切酶。

11.权利要求9或10一对转录激活子样效应因子核苷酸酶，其特征在于，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示。

12.一对转录激活子样效应因子核苷酸酶基因，其特征在于，是编码权利要求9～11任一项所述一对转录激活子样效应因子核苷酸酶的核苷酸序列。

13.权利要求12所述转录激活子样效应因子核苷酸酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。

14.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求2、3、7、8、12、13任一项所述的核苷酸序列中的任一个。

15.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求14所述的载体。

16.权利要求15所述宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为人离体细胞。

17.权利要求9～11任一项所述转录激活子样效应因子核苷酸酶在人胰岛素基因的识别和靶向修饰中的应用。

18.权利要求12或13任一项所述转录激活子样效应因子核苷酸酶基因在人胰岛素基因的识别和靶向修饰中的应用。

19.权利要求14所述重组载体在人胰岛素基因的识别和靶向修饰中的应用。

20.一种人胰岛素基因靶向修饰的方法，其特征在于，将权利要求9～11所述的转录激活子样效应因子核苷酸酶、权利要求12或13所述转录激活子样效应因子核苷酸酶基因或者权利要求14所述的重组载体转入人离体细胞，在30～37℃下培养1～4天，得到人胰岛素基因被靶向修饰的细胞。