[发明专利]果蝇视网膜发育模型的体外培养系统及其应用无效
申请号: | 201210165419.3 | 申请日: | 2012-05-25 |
公开(公告)号: | CN102757931A | 公开(公告)日: | 2012-10-31 |
发明(设计)人: | 储丹丹;陈炯 | 申请(专利权)人: | 南京大学 |
主分类号: | C12N5/07 | 分类号: | C12N5/07;C12Q1/68;C12Q1/02 |
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地址: | 210061 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 果蝇 视网膜 发育 模型 体外 培养 系统 及其 应用 | ||
1.一种果蝇视网膜发育模型体外培养的构建方法,其特征包括以下步骤:
(1)配制用于果蝇视网膜体外培养的器官培养液;
(2)在上述培养液中分离获得果蝇视网膜,将其置于透气性的可视容器中,室温培养;
(3)使用激光共聚焦显微镜追踪记录视网膜细胞的发育过程。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,器官培养液由体积百分含量的以下组分构成:89%昆虫细胞培养基(Schneider’s Drosophila medium)、10%热灭活胎牛血清(heat-inactivated feral bovine serum)、1%青霉素-链霉素混合溶液(penicillin/streptomycin),外加0.2mg/ml胰岛素(insulin)。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的果蝇视网膜为具有荧光标记的果蝇三龄晚期幼虫的眼盘(eye disc)。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将果蝇视网膜浸透在器官培养液中,置于由透气性底膜(Lumox dish),聚三氟氯乙烯(Halocarbon 700oil)和盖玻片组成的透气性可视容器中间的液体腔内;液体腔厚度为0.3-0.6毫米。
5.根根权利要求1所述的方法,其特征在于,运用激光共聚焦显微镜检测视网膜发育过程的时间为视网膜放入透气性可视容器液体腔后5分钟至三小时;激光扫描间隔时间为10分钟至3小时,且每次扫描前需要调整焦距至图像清晰。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,运用激光共聚焦显微镜检测视网膜发育过程时,激光强度设定为0.1%-10%,选取物镜为60倍或100倍放大。
7.根据权利要求1至6任一权利要求所述的果蝇视网膜发育模型体外培养方法,其特征在于,使用该模型筛选视网膜早期发育相关基因的方法是:分离待筛选的基因突变果蝇的视网膜,以野生型果蝇作为对照,其余培养条件完全相同,培养适当时间后,使用激光共聚焦显微镜观察基因突变果蝇的视网膜发育进程的变化;若有可分辨的发育缺陷产生,则视待筛选基因为视网膜早期发育相关基因。
8.根据权利要求1至7任一权利要求所述的果蝇视网膜发育模型体外培养方法,其特征在于,使用此模型进行药物毒理学评价的方法是:器官培养液中加入待筛选药物,以加入等量的空白溶剂作为对照,其余培养条件完全相同,培养适当时间后,使用激光共聚焦显微镜观察待筛选药物对视网膜发育进程的影响;若有可分辨的发育缺陷产生,则视待筛选药物为视网膜发育毒性药物。
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