[发明专利]一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒

说明书

所属技术领域

本发明涉及一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒，尤其是能快速、安全、稳定的提取动物各种组织样中的DNA，所用试剂经济、安全，属于生物技术领域。

背景技术

基因组DNA主要指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子，主要存在于细胞核、线粒体、叶绿体内。

基因组DNA的提取是许多分子生物学实验的基础，如普通PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP和Southern bot等。

传统提取基因组DNA的方法步骤繁琐，花费时间较长，如果提取较多头动物组织样时，会耗费大量的人力物力。

提取基因组DNA的方法主要包括酚仿抽提法、浓盐法、阴离子去污剂法等。总的方法和原理为：

碎化组织样：采用眼科剪剪碎法、液氮研磨法或匀浆器研磨法将动物组织样碎化。

消化蛋白质：采用SDS或苯酚等蛋白变性剂水浴消化蛋白质，分解掉尽可能多的蛋白质。

分离析出DNA：先将DNA和RNA这两种核酸中的RNA去除，再将DNA与蛋白质中的蛋白质去除，后用等体积的异丙醇或无水乙醇使DNA析出。

洗涤干燥DNA：通过70%乙醇洗涤2次DNA，并于室温干燥。

溶解保存DNA：加入一定体积的TE缓冲液或双蒸水（ddH₂O），4°C保存。

提取过程所用试剂较多，操作复杂且耗时较长。当提取大批量样品中的DNA时，工作量会很大。

发明内容

技术问题

  本发明所要解决的技术问题是提供一种“傻瓜式”动物组织样中的基因组DNA提取方法，操作简单、所用试剂安全经济、提取效率高、DNA纯度好且能快速、充分溶解，以适应大批量样品基因组DNA的提取。

技术方案

为解决上述技术问题，本发明的技术解决方案是：

一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒，包括：细胞裂解液（溶液A）、6 mol/L的NaCl溶液（溶液B）、三氯甲烷（溶液C）、TE缓冲液（溶液D）和蛋白酶K。

  碎化组织样：将动物组织样用剪刀切下20-60 mg，放在一个1.5 ml离心管盖里，加100 μl 细胞裂解液，用眼科剪把组织样剪碎，约剪5分钟，然后每管再加入300 μl的裂解液（溶液A）。

消化蛋白质：向每个装组织样的离心管内加入15 μl的蛋白酶K，上下颠倒摇匀，放于65 °C的振动水浴锅内，水浴2个小时。

分离DNA：将水浴后的样品每管加入200 μl的6 mol/L 的NaCl 溶液（溶液B），然后放在冰块上，再加入500 μl的三氯甲烷（溶液C），上下摇动装有样品的盒子10分钟左右，将样品4 oC 离心12000转/分，10分钟。

析出DNA：取离心管的上清液（约600 μl）到新的1.5ML离心管中，对号标上记号，加入1000 μl无水乙醇（或等体积的异丙醇），小心的摇动离心管直至DNA析出，静置2分钟。将析出DNA的离心管4 oC离心, 12000 转/分，5分钟。

  洗涤DNA：倒出离心管中溶液，加入1000 μl的70%乙醇，轻弹离心管底部，使DNA浸到液体中，以便充分洗涤；4 oC离心, 12000转/分，2分钟。重复此步骤，洗涤第二次。

快速干燥DNA：倒出离心管中溶液，用卫生纸吸走管口残液，离心甩下管壁上的乙醇，用10 ul移液器吸走剩余乙醇，倒置5分钟离心管。

溶解DNA：加入130-600 ul的TE缓冲液（溶液D）或ddH₂O，放置4 oC保存过夜，待用。

有益效果

  试剂盒含有A、B、C、D四种溶液，具有操作简单、提取速度快、成本低廉的特点。

本发明先用蛋白酶K将细胞核蛋白中的蛋白质除去，再用高盐溶液对核酸进行提纯，使DNA和RNA分开，最后再用移液器快速干燥DNA，操作简单，不但提取速度快，而且所提取的DNA质量高。

本发明通过将DNA提取过程简化，提取试剂组合优化，在保证DNA质量的前提下达到了快速、高效提取的效果：组织样只需5分钟剪碎、细胞裂解时间只需2个小时、DNA干燥只需5分钟，省时省力，特别适用于提取大批量动物组织样本DNA的试验。