[发明专利]一种抑制人类免疫缺陷病毒的真菌提取物的制备方法

权利要求书

1.一种制备保藏编号为CGMCC No.6039的炭团菌属真菌Q-s-4(Hypoxylon sp.)的发酵产物提取物的方法，包括步骤：

(1)真菌的发酵培养

将真菌Q-s-4自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于含PDA培养基的平皿中，于25℃恒温培养5-12天，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基中进行发酵培养；

液体培养基组成按重量百分含量计算为：麦麸1-5％，煮20-30分钟，取汁，葡萄糖1-4％，KH₂PO₄0.1-0.4％，MgSO₄0.1-0.3％，pH自然；三角瓶或其他容器装液体培养基，装量为容器体积的30-60％；灭菌后接入真菌Q-s-4，22-26℃振荡暗培养12-30天，振荡转速90-130转/分钟；

(2)真菌发酵产物的获得

真菌Q-s-4经发酵培养后，用80-100目尼龙网过滤，分离菌丝体和发酵液；菌丝体用水冲洗干净，挤压除去大部分水分；发酵液40-60℃减压浓缩至原发酵液体积的10-20％；

(3)真菌发酵产物提取物的制备

①菌丝体用甲醇或95％乙醇超声提取2-3次，每次40-60分钟，每次提取用的溶剂体积为菌丝体重量的8-12倍；或菌丝体用甲醇、95％乙醇或丙酮渗漉提取，提取用的溶剂体积为菌丝体重量的12-15倍；所得提取液于40-60℃减压浓缩后干燥，得到菌丝体总提取物；

②发酵液浓缩物加入95％乙醇或无水乙醇进行醇沉，所用溶剂体积为发酵液浓缩物体积的3-5.5倍，放置24h分层，收集上清液，于40-60℃减压浓缩后干燥，得到发酵液总提取物；

③上述两种总提取物，分别分散于水中，依次以石油醚和乙酸乙酯萃取至溶剂层无色；合并各萃取液，于40-60℃减压浓缩后冷冻干燥，得到各总提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：按上述方法制备的保藏编号为CGMCC No.6039的炭团菌属真菌Q-s-4(Hypoxylon sp.)的提取物，能够抑制人类免疫缺陷病毒整合酶的活性，能够用于抗人类免疫缺陷病毒药物的研究和应用。