[发明专利]一种抑制人类免疫缺陷病毒的真菌提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说涉及一种能够抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)整合酶表达的内生真菌提取物的制备技术。

技术背景

获得性免疫缺陷综合症(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDs)由感染人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)导致。自1981年由美国疾病控制中心首次报道以来，现已经成为世界主要致死病之一。到2007年为止，世界范围内约有3340万人感染HIV病毒，其中2240万居住在非洲撒哈拉以南地区，约三分之二的人口感染HIV病毒。截至2010年底，全球中低收入国家中约有660万人接受了抗逆转录病毒药物治疗，比2001年增长了近22倍。目前临床上应用的近30种抗HIV-1药物，辅以高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antiretroviral Therapy，HAART)可以在一定程度上延长HIV感染者的生存期和改善感染者的生活质量。但是，由于HIV疫苗研究进展的缓慢以及越来越多变异HIV的挑战，研究开发新型抗HIV化学药物及治疗方法仍然具有重要意义。HIV进入人体后，主要通过与宿主细胞膜直接融合进入细胞，HIV的复制周期主要包括吸附及穿入、逆转录与环化、整合、转录、翻译、病毒颗粒装配、病毒体成熟、出芽等阶段。抗HIV物质针对不同的作用位点发挥抗病毒作用现阶段，主要抗HIV药物主要分为五大类：(1)HIV-1逆转录酶制剂；(2)HIV-1进入抑制剂；(3)HIV-1蛋白酶抑制剂；(4)HIV-1整合酶抑制剂；(5)其它。

因此，基于HIV-1病毒的不稳定性，变异迅速，新细菌株和病毒株不断出现导致原有药物治疗谱窄，耐药性严重等新特性，科研工作者针对HIV-1复制周期的各个阶段广泛的寻找和研究用于不同靶点的有效药物，旨在抑制HIV-1的复制。

近年来，我国药用植物内生真菌及活性成分的研究成为药物开发的一个非常重要的领域，大自然为很多疾病提供了治疗药物的来源，许多药用植物已经被报道具有抗HIV-1的特性，这也应该是我国新药研究的优势所在，一旦发现活性，往往以该结构为先导化合物，合成活性更强、可溶性好及毒性低的药物。但大量开采植物会导致植物资源枯竭，环境污染破坏。内生真菌是存在于植物正常部位而不引起宿主植物明显症状的一类真菌。植物与其内生真菌的关系是互惠共生的。近年来一些研究表明，与药用植物共生的内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生理活性成分。利用发酵法生产与植物相同或相似的次生代谢产物，具有可大规

模工业化生产和易于进行质量控制等优点，并不会对自然资源造成破坏。所以从真菌发酵产物中寻找新型抗HIV和抗菌药物或先导化合物的研究，是当今国内药物研发的重要方向和活跃领域，也为我国新药研究的优势所在。

发明内容

本发明的目的是提供真菌液体发酵培养的方法和真菌发酵产物提取物制备的方法，该方法制备成本低，工艺简单、生产周期短，且污染小，可用于真菌的大规模工业化培养，并以真菌发酵物为原料工业化生产发酵产物的提取物。

本发明的另一目的是提供上述发酵产物的提取物用于抗人类免疫缺陷病毒的研发和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术是：液体发酵培养真菌Q-s-4，发酵产物分离为菌丝体和发酵液两个部分，用有机溶剂分别对菌丝体和发酵液部分进行提取，得到发酵产物的提取物。本发明所利用的真菌Q-s-4是从菊科蒿属植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的茎中分离得到的，经鉴定为炭团菌(Hypoxylon sp.)。该菌种于2012年4月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.6039。保藏和存活证明见附件。

具体地说，本发明所述的技术步骤如下：

1.真菌的发酵培养