[发明专利]一种低聚半乳糖的制备方法

权利要求书

1.一种低聚半乳糖的制备方法，包括以下步骤：

（1）使用戊二醛在15-35℃下与大孔弱碱苯乙烯树脂在搅拌下反应16-24h，使树脂活化；

（2）取液体β-半乳糖苷酶与步骤（1）所得的活化的大孔弱碱苯乙烯树脂在15-35℃下搅拌反应16-24h，得到固定化的β-半乳糖苷酶；

（3）将固定化的β-半乳糖苷酶加入乳糖溶液中，于48-52℃搅拌反应24-36h。

2.根据权利要求1所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤（2）所述的β-半乳糖苷酶在使用前经盐析进行提纯。

3.根据权利要求1所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤（2）中β-半乳糖苷酶与大孔弱碱苯乙烯树脂的配比为100-200U/g树脂；步骤（3）中所加入的乳糖浓度为45%-52%（w/w），并按照每千克乳糖（按干基计）加入6000-10000U固定化β-半乳糖苷酶。

4.根据权利要求1所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤（2）中所述β-半乳糖苷酶由环状芽孢杆菌产生。

5.根据权利要求1所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤（2）中所述β-半乳糖苷酶经以下步骤制备：

A．将保存的环状芽孢杆菌接种至LB固体培养基，于36-38℃下培养16-24h，使菌种活化；

B．取活化的菌种接种至20-50ml的LB液体培养基中，振荡培养4-6h后接种至装有LB培养基的种子罐中，于36-38℃下培养4-6h，得到种子培养液；

C．将种子培养液接入装有发酵培养基的发酵罐中培养36-48h，得到环状芽孢杆菌发酵液；

D．将发酵液经微滤或离心除去菌体，再将所得酶液浓缩，得到液体β-半乳糖苷酶。

6.根据权利要求5所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤C所述培养的方式为：将种子培养液接入发酵罐中培养16-20h后，补加乳糖，继续发酵20-28h。

7.根据权利要求5所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中所述环状芽孢杆菌为环状芽孢杆菌ATCC No.31382。

8.根据权利要求5所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中所述补加乳糖的方式为：补料量4~6g·L^-1，补料速度为0.4~0.6g·L^-1·h^-1。

9.根据权利要求5所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤C所述发酵培养基为：乳糖5-15g/L、半乳糖5-10g/L、大豆蛋白胨10-30g/L、玉米浸提液4-6g/L、酵母提取物2-4g/L、磷酸二氢铵2-4g/L、碳酸钠1-2g/L、大豆油8-15g/L、消泡剂0.5-2g/L。

10.根据权利要求5所述的一种低聚半乳糖的制备方法，其中步骤C中所述培养的条件为：温度36-38℃、pH6.8-7.5、溶氧≥30%、通气量0.5-2V·V^-1·min^-1、搅拌速度120-220rpm。