[发明专利]抗体人源化改造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人源化抗体及其人源化改造方法。

背景技术

P185是由癌基因Her2/erbB-2编码的一种细胞表面的重要的受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体家族。P185/Her2受体与该家族其他成员类似，由胞外区，跨膜区和胞内区三个结构域组成，其中胞外区（ECD）又分为四个亚区，其中的I、III亚区为亮氨酸富含区，Ⅱ、Ⅳ亚区为半胱氨酸富含区（Carpenter G.(1987)Receptors of epidermal growth factor and other polypeptide mitogens.Annu.Rev.Biochem.56:881-914）。表皮生长因子家族受体广泛地分布于多种组织，尤其在上皮组织、间质组织以及神经发生组织中表达，在调节细胞的增殖、分化、发育、黏附和迁移中起到了重要的作用。P185/Her2作为表皮生长因子受体家族的信号转导网络中最重要的一员，其表达水平的异常与细胞信号转导紊乱、肿瘤的发生和恶性发展紧密相关（Nancy EH,Heidi A,Lane N.(2005)ErbB receptors and cancer:the complexity of targeted inhibitors Nat.Rev.Cancer 5:341-354）。

近年来P185/Her2一直作为肿瘤治疗领域中的热点被广泛研究。1985年，Greene M.I.研究组发现，抗P185/Her2胞外区的单克隆抗体能够使已经转化的Her2高表达的NIH3T3表型逆转，使肿瘤细胞的表型趋于正常化，同时可以下调Her2受体的表达水平（Drebin JA,Link VC,Stern DF,Weinberg RA,Greene,MI.(1985)Down-modulation of an oncogene protein product and reversion of the transformed phenotype by monoclonal antibodies.Cell 41:695-706）。随后该实验室又发现，抗Her2的单克隆抗体能抑制移植入裸鼠体内的Her2转化的NIH3T3肿瘤细胞的生长，从而第一次通过体内实验证明了抗Her2单抗可能对Her2高表达肿瘤有临床治疗的价值（Drebin JA,Link VC,Weinberg RA,Greene MI.（1986）Inhibition of tumor growth by a monoclonal antibody reactive with an oncogene-encoded tumor antigen.Proc Natl Acad Sci USA 83:9129-9133）。这一发现大大促进了抗Her2单克隆抗体的抗肿瘤作用的研究，也揭示了抗体在肿瘤治疗上应用的前景。但是，由于目前杂交瘤技术制备的单克隆抗体都是鼠源抗体，应用于人体时会产生人抗鼠抗体（HAMA）反应，所以不能直接用于人体内的疾病治疗。因此必须对单克隆抗体进行人源化改造，以减少和消除鼠源蛋白的免疫原性。

最早用于单克隆抗体人源化改造的方法是构建嵌合抗体（Vaughan TJ,Osbourn JK,Tempest PR.（1998）Human antibodies by design.Nat.Biotechnol 6：535-539）。该方法是将鼠源抗体的可变区和人抗体恒定区通过基因工程技术连接起来，即将鼠源抗体的恒定区基因替换为人抗体恒定区基因，与抗原结合的可变区部分仍然是鼠源抗体。此方法构建出的工程化嵌合抗体最大限度的保留了识别靶抗原能力的鼠源抗体可变区，同时又拥有了人抗体所有的恒定区的免疫学杀伤效应，而且由于这种嵌合抗体的免疫原性相比原始的鼠源抗体降低了2/3，所以可以应用于人体治疗（Davis TA.（1999）Final report on the safety and efficacy of retreatment with rituximab for patients with non-Hodgkin’s lymphoma.Blood 94：88a）。但由于其分子中还保留了1/3的鼠源部分，用于长期临床治疗还有可能发生人抗鼠抗体反应。