[发明专利]春石斛兰嫩茎段离体培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种石斛兰嫩茎段离体快速培养方法，利用抽生的长度10cm左右的新枝经清洗消毒后诱导丛生芽，再经过培养后获得完整的试管苗，属于石斛兰培养方法技术领域。

背景技术

石斛兰是一种喜温喜湿高档名贵热带兰，其中的春石斛兰是主要种类之一，适应性较强，花色繁多艳丽，花期长达数月，观赏价值高，其种苗靠扦插繁殖，繁殖率低并且易带病毒，无法满足生产用种苗之需。

发明内容

本发明的目的是提供一种繁殖速度快、繁殖率高的春石斛兰种苗培养方法。

为达到上述目的，本发明提供了一种春石斛兰的嫩茎段离体快速培养方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：选取新抽生的长度为5～15厘米的嫩枝，剥去叶片及叶鞘，用洗洁精清洗，在超净工作台上先用75vol％的乙醇溶液浸泡消毒0.5～1.5min，再用洁尔敏溶液浸泡消毒15min，所述的洁尔敏溶液中洁尔敏和水的体积比为1∶50，最后用0.1vol％的升汞溶液浸泡消毒15min，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份；

第二步：将第一步得到的嫩枝切成0.5～1.5cm长的茎段，每个茎段带1个茎节，接种于第一培养基中诱导腋芽萌发生长；

第三步：切下第二步得到的新芽，接种到第二培养基中诱导丛生芽生长；

第四步：将丛生芽切成单芽后，接种到第三培养基上进行生根培养，得到生根的试管苗；

第五步：将生根的试管苗移入苔藓基质中，装入塑料穴盘中育成“苔藓穴盘苗”，移栽后浇足水，第二天开始叶面喷洒清水，每天2次，半月后追施营养液，每月二次，经三个月以上培养后，移入花盆中作盆花培养或作塑料大棚大苗培养。

优选地，所述的第二步中的第一培养基由在MS培养基中添加细胞分裂素、赤霉素、萘乙酸和香蕉泥得到，第一培养基中细胞分裂素的浓度为1mg/L，赤霉素的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为0.1mg/L，香蕉泥的浓度为50g/L。

优选地，所述第三步中的第二培养基由在MS培养基中添加细胞分裂素、赤霉素、萘乙酸和香蕉泥得到，第二培养基中细胞分裂素的浓度为1-2mg/L，赤霉素的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为0.1-0.2mg/L，香蕉泥的浓度为50g/L。

优选地，所述第四步中的第三培养基由在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸和萘乙酸得到，第三培养基中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，萘乙酸浓度为0.1mg/L。

优选地，所述第五步中的营养液的成分是：含有0.1vol％磷酸二氢钾和0.1vol％硝酸铵的水溶液。

与现有技术相比，本发明的优点是：所得到的春石斛兰种苗繁殖速度快、繁殖率高。

具体实施方式

下面结合实施例来具体说明本发明。

实施例

一种春石斛兰的嫩茎段离体快速培养方法，具体步骤为：

第一步：选取新抽生的长度为10厘米的嫩枝，剥去叶片及叶鞘，用洗洁精清洗二遍，在超净工作台上先用75vol％的乙醇溶液浸泡消毒1min，再用洁尔敏溶液浸泡消毒15min，所述的洁尔敏溶液中洁尔敏和水的体积比为1∶50，最后用0.1vol％的升汞溶液浸泡消毒15min，用无菌水冲洗三遍，用无菌滤纸吸干水份；

第二步：将第一步得到的嫩枝切成1cm长的茎段，每个茎段带1个茎节，接种于第一培养基中诱导腋芽萌发生长；第一培养基由在MS培养基中添加细胞分裂素、赤霉素、萘乙酸和香蕉泥得到，第一培养基中细胞分裂素的浓度为1mg/L，赤霉素的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为0.1mg/L，香蕉泥的浓度为50g/L；

第三步：切下第二步得到的新芽，接种到第二培养基中诱导丛生芽生长；第二培养基由在MS培养基中添加细胞分裂素、赤霉素、萘乙酸和香蕉泥得到，第二培养基中细胞分裂素的浓度为1.5mg/L，赤霉素的浓度为0.2mg/L，萘乙酸的浓度为0.15mg/L，香蕉泥的浓度为50g/L；

第四步：将丛生芽切成单芽后，接种到第三培养基上进行生根培养，得到生根的试管苗；第三培养基由在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸和萘乙酸得到，第三培养基中吲哚丁酸的浓度为0.5mg/L，萘乙酸浓度为0.1mg/L；培养室温度23℃，每天12小时光照，光照强度3000LX。