[发明专利]四氢异喹啉-3-羧酸修饰的LARGD七肽、其合成、抗血栓活性和应用

说明书

技术领域

本发明涉及3种新型抗血栓拟肽，涉及它们的分子模拟方法，涉及它们的制备方法，涉及它们对糖蛋白IIb/IIIa和P-选择素表达的抑制作用，涉及它们的抗血小板聚集作用，进一步涉及它们在大鼠血栓形成模型上的抗血栓作用。因而本发明涉及3种新型抗血栓拟肽作为抗血栓剂的临床应用前景。本发明属于生物医药领域。 

背景技术

在全球范围内，血栓性疾病的发病率和死亡率都居首位。血栓患者体内的血栓有两种，一种是由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓，另一种是由血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成的血栓。 

P-选择素以溶解型P-选择素和不溶型P-选择素两种形态存在。在血小板活化状态下，不溶型P-选择素从血小板内膜层快速移动到活化的血小板的表面表达并被切割为溶解型P-选择素进入血液循环。溶解型P-选择素介导形成大量稳定的由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓。抑制不溶型P-选择素表达并被切割为溶解型P-选择素是设计抗血栓药物的重要靶点。 

血小板被激活时糖蛋白IIb/IIIa外化，与纤维蛋白原结合，使血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成血栓。研究糖蛋白IIb/IIIa与纤维蛋白原α链及纤维蛋白原γ链的结合方式，确定了RGDS，RGDV和RGDF是血小板聚集过程中导致纤维蛋白原被糖蛋白IIb/IIIa识别并与纤维蛋白原结合的关键序列。采用RGDF或RGDS或RGDV的相关序列占据血小板活化状态下糖蛋白IIb/IIIa上纤维蛋白原的结合位点是发明抗血栓药物的重要手段。 

因为现有的抗血栓药物设计或单纯性针对P-选择素或单纯性针对糖蛋白IIb/IIIa，还因为单一地抑制溶解型P-选择素介导的由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓或单一地抑制糖蛋白IIb/IIIa介导的血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成的血栓都得不到满意的临床疗效。 

为适应临床要求，发明人提出发展可同时针对两种血栓的新型抗血栓剂。在分析了P-选择素的结构，定义了它的活性口袋和确定了可与活性口袋对接的3S-四氢异喹啉-3-羧酸 的基础上，发明人运用分子建模技术设计了合乎要求的可抑制糖蛋白IIb/IIIa和P-选择素表达的三种新型拟肽，N-[(3S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Ser)-Ser，N-[(3S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Val)-Val和N-[(3S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu-Arg-Gly-Asp(Phe)-Phe。 

发明内容

本发明的第一个内容是通式I代表的三种新型拟肽，式中AA代表Ser或Val或Phe。 

本发明的第二个内容是提供通式I代表的三种新型拟肽的制备方法，该方法包括： 

1)在甲醛存在下L-Phe在浓盐酸中合成为(3S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸； 

2)在NaOH水溶液中用(Boc)O₂将(3S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸转化为(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸； 

3)在无水THF中，在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下将(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸与Leu-OBzl缩合为N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu-OBzl； 

4)在2N NaOH水溶液中将N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Thr-OBzl皂化为N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu； 

5)采用液相方法从C端向N端逐步接肽制备HCl·Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl； 

6)在无水THF中，在DCC和HOBt存在下N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu与HCl·Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl缩合为N-[(3S)-N-Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基]-Leu-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-OBzl；