[发明专利]单核细胞移动抑制因子类似物及其合成和应用

权利要求书

1.单核细胞移动抑制因子类似物，其特征在于：在单核细胞移动抑制因子的活性肽段Cys-Asn-Ser的N端引入氨基酸Arg或 用D-Cys取代Cys后得到的肽序列Arg-Cys-Asn-Ser或D-Cys-Asn-Ser。

2.如权利要求1所述单核细胞移动抑制因子类似物在制备抗炎、抗氧化、防治缺血性脑血管疾病药物中的应用。

3.如权利要求1所述单核细胞移动抑制因子类似物的合成方法，包括以下工艺步骤：

（1）树脂的活化及预处理：

将wang树脂浸于二氯甲烷中，搅拌使树脂充分溶胀，抽干溶剂； 

（2）氨基酸的耦合

a、Ser的耦合：将经过预处理的树脂用DMF洗涤，干燥，加入到六氢吡啶与DMF的混合溶液，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到脱除Fmoc保护的树脂；将Fmoc保护的Ser溶于DMF中，搅拌使其充分溶解，加入过量的HOBT和HBTU，搅拌溶解后再加入DIEA，然后与脱除Fmoc保护的树脂混合，氩气保护、室温下搅拌反应1~2h，抽干，DMF洗涤，得到Fmoc-Ser-Wang；

b、Asn的耦合：将Fmoc-Ser-Wang加入六氢吡啶与DMF的混合溶液，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到Ser-Wang；将Fmoc保护的Asn溶于DMF中，搅拌使其充分溶解，加入HOBT和HBTU，搅拌溶解后再加入DIEA，然后与Ser-Wang混合，氩气保护、室温下搅拌反应1~2h，抽干、用DMF洗涤，得到Fmoc-Asn-Ser-Wang；

c、Cys或D-Cys的耦合：将Fmoc-Asn-Ser-Wang加入到六氢吡啶与DMF的混合溶液，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到Asn-Ser-Wang；将Fmoc保护的Cys或D-Cys溶于DMF中，搅拌使其充分溶解，加入HOBT和HBTU，搅拌溶解后再加入DIEA，然后与Asn-Ser-Wang混合，氩气保护、室温下搅拌反应1~2h，抽干，DMF洗涤，得到Fmoc-Cys-Asn-Ser-Wang或Fmoc-D-Cys-Asn-Ser-Wang；

d、Arg的耦合：将Fmoc-Cys-Asn-Ser-Wang加入到六氢吡啶与DMF混合溶液，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到Cys-Asn-Ser-Wang；将Fmoc保护的Arg溶于DMF中，搅拌使其充分溶解，加入HOBT和HBTU，搅拌溶解后再加入DIEA，然后与Cys-Asn-Ser-Wang混合，氩气保护、室温下搅拌反应1~2h，抽干、用DMF洗涤，得到Fmoc-Arg-Cys-Asn-Ser-Wang；

e、脱Fmoc保护：将Fmoc-Arg-Cys-Asn-Ser-Wang或Fmoc-D-Cys-Asn-Ser-Wang加入六氢吡啶与DMF的混合溶液中，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到Arg -Cys-Asn-Ser-Wang或D-Cys-Asn-Ser-Wang；

（3）多肽切割

将Arg-Cys-Asn-Ser-Wang或D-Cys-Asn-Ser-Wang分别用DCM和MeOH交替洗涤，抽干后与切割试剂加入固相合成仪中，室温反应2.5~3.5h；反应完毕后，反应液经砂芯过滤，TFA洗涤，在40℃以下减压蒸馏浓缩，浓缩液中加入冰冻乙醚沉淀多肽，然后将多肽用体积分数0~50%的冰乙酸水溶液溶解，于-20 ~ -80℃凝固、冻干，得粗肽Arg-Cys-Asn-Ser或D-Cys-Asn-Ser；

（4）多肽的纯化

a、粗肽脱盐：将粗肽Arg-Cys-Asn-Ser或D-Cys-Asn-Ser完全溶解于体积分数0.1~50%的冰乙酸水溶液中，加入凝胶柱中，洗脱，用紫外检测器监测，收集有吸收的组分，稀释后冷冻干燥，得到脱盐肽；

b、高效液相纯化：将脱盐肽用去离子水充分溶解，微孔滤膜过滤，滤液上高效液相色谱仪，每次进样3~4 mL，收集主要吸收峰的流出液，冻干，得到目标肽。

4.如权利要求1所述单核细胞移动抑制因子类似物的合成方法，其特征在于：上述各步骤中，所述六氢吡啶与DMF混合溶液中，六氢吡啶与DMF的体积比为1:20~1:0.5。

5.如权利要求1所述单核细胞移动抑制因子类似物的合成方法，其特征在于：所述各步骤中的搅拌反应为：搅拌3~5分钟，抽干；重复搅拌2~3次。