[发明专利]单核细胞移动抑制因子类似物及其合成和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一系列新单核细胞移动抑制因子类似物及其合成方法；本发明同时还涉及该单核细胞移动抑制因子类似物的应用——在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用。

背景技术

单核细胞移动抑制因子（MLIF），一种抗炎性反应的多肽，是从无菌培养的溶组织内阿米巴中发现的五肽，其结构为Met-Gln-Cys-Asn-Ser。体外培养和体内试验均证明该小分子肽能抑制人单核细胞、多形核白细胞的移动。溶组织内阿米巴通过产生该抗炎肽，影响细胞因子的分泌，抑制炎症反应的发生，逃避宿主免疫。文献报道，这种五肽分子不仅可以直接作用于炎症细胞，也可通过干扰炎性细胞因子的分泌影响炎症反应的过程，对TNF-α、IL-1β等炎症细胞因子的分泌以及相应受体的表达有明显的抑制作用，同时还能够抑制MIP-1α、IP-1β等炎症趋化因子的表达。

Morales-Mart′?nez等为了研究该小分子肽的活性中心，将Met-Gln-Cys-Asn-Ser进行分割，分为三个小分子肽，分别是Met-Gln-Cys、Gln-Cys-Asn和Cys-Asn-Ser，或对肽链中的氨基酸进行替换，分别研究其抗炎活性，研究发现其末端三肽Cys-Asn-Ser是该小分子肽的抗炎活性基团，其抗炎活性与Met-Gln-Cys-Asn-Ser相当。

杨鹏远等人发现，MLIF及其活性基团Cys-Asn-Ser能显著降低小鼠脑缺血再灌注引起的脑梗死体积，并可明显改善小鼠缺血后的神经行为。该多肽小分子的脑保护作用较强，且由于分子量小，易于透过血脑屏障，具有显著的脑通透性优势。

缺血性脑损伤是一个复杂的病理生理过程，曾经认为缺血性脑损伤是由于脑血流中断后，脑细胞能量供应不足进而触发脑细胞凋亡，后来研究发现脑血流中断和再灌注使脑细胞产生损伤级联反应。其中脑缺血再灌注后引发的炎症反应和自由基引起的脂质过氧化两者在缺血性脑损伤的发病过程中起着不容忽视的作用。缺血再灌注后，急性期炎症反应可加重脑组织水肿，介导继发性的脑组织损伤。在炎症反应中，脑缺血后局部炎症因子、趋化因子及黏附分子的表达是脑缺血性损伤向炎症性损伤转变的基础，因此抑制炎性细胞的浸润及炎性细胞因子、黏附分子等的表达有望成为防治脑缺血性疾病的有效措施。另外，在缺血再灌注期间自由基的产生增多，脂质过氧化反应增强，自由基清除功能下降，使神经细胞受到损伤。同时多肽类药物的体内酶解稳定性也是一个一直以来影响药物本身活性的重要因素之一，因此，从增加药物抗酶解能力也是近年来肽类药物改造的方向之一。

发明内容

本发明的目的之一是提供一类全新结构的单核细胞移动抑制因子类似物；

本发明的目的之二是提供上述单核细胞移动抑制因子类似物在制备临床治疗药物中的应用；

本发明的目的之三是提供一种上述单核细胞移动抑制因子类似物的合成方法。

（一）MLIF类似物

本发明的单核细胞移动抑制因子类似物（MLIF类似物）是在单核细胞移动抑制因子的活性肽段Cys-Asn-Ser的N端引入氨基酸Arg或用D-Cys取代Cys后得到的肽序列Arg-Cys-Asn-Ser或D-Cys-Asn-Ser，以增加其细胞膜的穿透能力和提高小分子肽在体内的酶解稳定性。

 MLIF小分子的活性肽段Cys-Asn-Ser及MLIF类似物D-Cys-Asn-Ser、Arg-Cys-Asn-Ser，的结构如下：

          活性肽段Cys-Asn-Ser

Arg-Cys-Asn-Ser

                             D-Cys-Asn-Ser

（二）MLIF类似物的合成

本发明单核细胞移动抑制因子类似物的合成方法，包括以下工艺步骤：

（1）树脂的活化及预处理

将wang树脂浸于二氯甲烷中，搅拌使树脂充分溶胀，抽干溶剂； 

（2）氨基酸的耦合

a、Ser的耦合：将经过预处理的树脂用DMF洗涤，干燥，加入到六氢吡啶与DMF的混合溶液，搅拌使其充分反应；反应完成后，用DMF洗涤，得到脱除Fmoc保护的树脂；将Fmoc保护的Ser溶于DMF中，搅拌使其充分溶解，加入过量的HOBT和HBTU，搅拌溶解后再加入DIEA，然后与脱除Fmoc保护的树脂混合，氩气保护、室温下搅拌反应1~2h，抽干，DMF洗涤，得到Fmoc-Ser-Wang；