[发明专利]樱桃砧木嫩茎段离体培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种樱桃砧木嫩茎段离体快速培养方法，利用当年抽生的半木质化的新枝经清洗消毒后诱导丛生芽，再经过培养后获得完整的试管苗，属于樱桃培养方法技术领域。

背景技术

樱桃(Prunus)为蔷薇科樱属(Cerasus Mill.)的落叶乔木。樱桃属植物有100余种，主要栽培种有中国樱桃(Prunus pseudoerasus Lindl.)、欧洲甜樱桃(Prunus avium L.)、欧洲酸樱桃(Prunus cerasus L.)和毛樱桃(Prunus tomentosaThub.)四个种。樱桃的果实是一种高档水果，适应性较强，营养丰富，甜酸可口，经济价值高。樱桃繁殖主要依靠扦插、嫁接繁殖，由于收到砧木问题的制约，限制了樱桃的生产和发展。樱桃组织培养技术始于20世纪70年代末，以茎尖、茎段、子叶、根尖、种子和花器官等器官作为外植体进行离体培养，是樱桃组织培养中一个主要的方面。同时，对胚培养、细胞悬浮培养和胚状体的诱导也进行了初步的研究；近些年，在组织细胞培养物的超低温保存以及基因工程方面也取得了一些进展。目前植物组织培养方面应用最多、最广泛和最有效的是脱毒和离体快繁，利用组织培养快速繁育砧木苗的方法大致分为培养材料的选择与灭菌、培养基的选择、芽分化与增殖继代、诱导生根和移栽等阶段。

樱桃茎尖组织培养是建立组织培养程序中一种简单易行的方法。采用茎尖培养进行快繁，繁殖系数高，成苗快，苗木整齐、一致、质量好。有关研究者先后对樱桃4个种的众多品种及变种进行了茎尖离体培养。现有樱桃繁殖用砧木其繁殖率低，且易带病毒，无法满足生产用种苗之需。

发明内容

本发明的目的是提供一种繁殖速度快、繁殖率高的樱桃砧木种苗培养方法。

为达到上述目的，本发明提供了一种樱桃砧木嫩茎段离体培养方法，其特征在于，具体步骤如下：

第一步：选取新抽生的半木质化的嫩枝，剪去叶片，用洗洁精清洗，在超净工作台上先用75vol％的乙醇溶液浸泡消毒1min，然后用0.1vol％的升汞溶液浸泡消毒15min，再用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干水份；

第二步：将第一步得到的嫩枝切成1cm长的茎段，每个茎段带1-2个茎节，接种于第一培养基中诱导腋芽萌发生长；

第三步：切下第二步得到的新芽，接种于第二培养基中诱导丛生芽生长；

第四步：将第三步得到的丛生芽切成单芽后，接种于第三培养基上进行生根培养，得到生根的试管苗；

第五步：将第四步得到的试管苗移入体积比为1∶1的泥炭+珍珠岩的基质中，装入塑料穴盘中育成穴盘苗，移栽后浇足水，第二天开始叶面喷洒清水，每天2次，半月后追施营养液，每月二次，经三个月以上培养后，移至塑料大棚作砧木大苗培养。

优选地，所述第二步中的第一培养基为：1/2MS基本培养基+2mg/L玉米素+0.2mg/L萘乙酸。

优选地，所述第三步中的第二培养基为：MS基本培养基+1mg/L细胞分裂素+0.5mg/L激动素+0.5mg/L吲哚丁酸。

优选地，所述第四步中的第三培养基为：1/2MS基本培养基+0.5mg/L吲哚丁酸+0.1mg/L半木质化嫩枝萘乙酸。

优选地，所述第二步中的第一培养基、第三步中的第二培养基和第四步中的第三培养基均置于23℃，光照为12h/d，光照强度为3000lx的条件下培养。

优选地，所述第五步中的营养液为什么浓度为0.1％的磷酸二氢钾与什么浓度为+0.1％的硝酸铵的混合液。

与现有技术相比，本发明的优点是：所得到的樱桃砧木种苗繁殖速度快、繁殖率高，可达1∶3，一个丛生芽一年中可繁殖多达15万个单芽，是扦插等培养方法无法比拟的。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例作详细说明如下。

实施例

一种樱桃砧木嫩茎段离体培养方法，具体步骤为：

第一步：选取新抽生的半木质化嫩枝，剪去叶片，用洗洁精清洗二遍，在超净工作台上先用75vol％的乙醇溶液浸泡消毒1min，再用0.1vol％的升汞溶液浸泡消毒15min，用无菌水冲洗三遍，用无菌滤纸吸干水份；

第二步：将第一步得到的嫩枝切成1cm长的茎段，每个茎段带1-2个茎节，接种于第一培养基中诱导腋芽萌发生长，培养室温度23℃，每天12小时光照，光照强度3000lx，第一培养基由在1/2MS培养基中添加玉米素、萘乙酸得到，第一培养基中玉米素的浓度为2mg/L，萘乙酸的浓度为0.2mg/L；