[发明专利]一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的制备方法。

背景技术

溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)是引起牙鲆、鳗鲡等许多名贵经济鱼类致病的病菌之一，严重威胁着我国水产养殖业的发展。可给渔业和养殖业带来巨大的经济损失。传统防治溶藻弧菌感染的方法主要采用抗生素和减毒、灭活疫苗。抗生素的长期使用可使鱼类产生耐药性，而且残留的抗生素可通过食物链对人类造成危害。减毒疫苗的安全性难以掌握；而用物理、化学方法制备的灭活疫苗，抗原活性可能遭到破坏，且残存的杂质还可能引起鱼的炎症反应而死亡。

针对引起细菌性鱼病的溶藻弧菌抗独特型抗体具有良好的免疫原性和安全性，而由基因工程构建的抗独特型抗体可变区的小分子单链抗体一不但具备有分子量小，穿透力强，易于大量生产和降低成本等优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗体分子小，免疫原性低，组织穿透力强，使用方便，有效，可行，可大规模生产的鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明所述的一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其特征在于，利用鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆出重链(V_H)和轻链(V_L)可变区基因，通过基因重组构建scFv及原核表达载体PET32a-AL，转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。scFv基因序列全长747碱基对，编码249个氨基酸，符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征，含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基。ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其基因序列和氨基酸序列如下：

1 cg gccgaggtgaag

A  E  V  K

15 ctgaaggagtctggggctgagctggtaaggcctgggacttcagtg

L  K  E  S  G  A  E  L  V  R  P  G  T  S  V

60 aaggtgtcctgcaaggcttctggatacgcctttactaattacttg

K  V  S  C  K  A  S  G  Y  A  F  T  N  Y  L

------------CDRH1-----

105 atagagtgggtaaagcagaggcctggacagggccttgagtggatt

I  E  W  V  K  Q  R  P  G  Q  G  L  E  W  I

----

150 ggagtgattaatcctggaagtggtggtactaactacaatgagaag

G  V  I  N  P  G  S  G  G  T  N  Y  N  E  K

----------------------CDH2---------------

195 ttcaagggcaaggcaacactgactgcagacaaatcctccagcact

F  K  G  K  A  T  L  T  A  D  K  S  S  S  T

240 gcctacatgcagctcagcagcctgacatctgatgactctgcggtc

A  Y  M  Q  L  S  S  L  T  S  D  D  S  A  V

285 tatttctgtgcaagagggcggttcccccattactatgctatggac

Y  F  C  A  R  G  R  F  P  H  Y  Y  A  M  D

---------------CDRH3----------

330 tactggggtcaaggaacctcagtcaccgtgtcgtcgggtggaggc

Y  W  G  Q  G  T  S  V  T  V  S  S  G  G

--

375 ggcggcggctccggtggtggtggatccggtggtggtggttct gac

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